今天开始拿zygote 做ISH 我发现，以前用 paraformadehyde fix，在换到100%甲醇保存在-80度C的mice zygote。 zygote从PCR tube 里面弄出来，超级难吸的。 还有後面每的步骤偷痛不欲生。请问各位前辈都置换zygote的buffer? 下面是我的每个步骤: 用200ul pipette 从 PCR tube 吸出里面的胚胎(没法知道有没有吸完胚胎)， 放进已经加好95% 甲醇(with 5%DEPC泡成的 1倍PBS)，然後用mouth pipette 一步一步换成100% EDPC泡成的 1倍PBS。 再换到 50mM Tri-HCl ph=7.5 with 20ug/ml protein kinase 做Antigen retrival 37度C 10分钟 再用mouth pipette 吸到 由DEPC泡成的 1倍PBS wash 5次!! 在用乙醇一步一步换成100%乙醇，然後air dry (我忘记用乙醇来置换，就直接pre-hy了) 接着在pre-hybridize 65度C 1 hour 然後才hybridize overnight in 65度C 置换zygote 真的有够难的，我有尝试把buffer吸乾，在加入下一个步骤的buffer。 似乎有比较好一点点，可是乙醇的脱水依旧会碰到不好吸乾的问题 发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出 以方便板友帮您追踪问题 若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让， 请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除 ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章---- --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 111.250.21.149 ※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1470243732.A.ED5.html