作者phoebe1620 (Phoebe)
看板Biotech
标题[求救] 银染染色问题
时间Tue Aug 9 18:53:25 2016
大家好，最近因为做GST pull down而需要用此染色法，我跑完胶先染coomassie blue，
看只有染到GST的蛋白，但看不到interacting protein，所以就接着染银染，染之前先de
stain过了，我们实验室用的牌子是Bio Rad的，因
为没经验所以步骤就照上面走，staining and developing也照上面染了20分钟，後来才
知道这步骤不能太久，於是我就褪染再重新染一次，在旁边看才几秒锺的时间，还没看到
band整片就变色了(哭)，就只好报废重新来过，後来去网路上查资料使用的容器要很乾净
，如果克服这个问题，请问银染过程还需要注意什麽问题呢?谢谢!
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※ 编辑: phoebe1620 (140.112.72.46), 08/09/2016 18:54:27
※ 编辑: phoebe1620 (140.112.72.46), 08/09/2016 19:14:01
1F：→ Ianthegood: 先照protocol走过一次呗 银染没有退了再染的啦 08/09 23:14
2F：推 tynse71864: 我是全用灭菌水 东西尽量当天现配 (kit我就不清楚了) 08/10 00:10
3F：→ tynse71864: develop应该是苏打水溶液 大概等到有颜色(你预期的地 08/10 00:11
4F：→ tynse71864: 方)就可以停止了 08/10 00:11
5F：→ tynse71864: 尽量跑0.75mm 的薄胶，太厚染的程度会不均 08/10 00:13
6F：→ tynse71864: 另外有用 WB确认过interacting protein有被抓下来吗？ 08/10 00:16
7F：→ tynse71864: 不然你染了半天没东西也没法下结论 08/10 00:16
8F：→ phoebe1620: 谢谢各位的建议~我的protein是未知的，要做proteinID 08/10 08:48
9F：→ phoebe1620: 的，所以无法用WB去看 08/10 08:48
10F：推 tynse71864: 之後要打 MS的吗? 那就忽略我最後一行 XD 08/10 09:20
11F：→ tynse71864: 容器会全用 detergent洗过 08/10 09:20
12F：→ phoebe1620: 是的~谢谢你的意见:) 08/11 19:19
13F：推 LIAR: 庄荣辉没用苏打，用NaOH耶 08/21 23:06
14F：推 tynse71864: 其实就是要硷性环境，让HCHO能在硷性环境中把Ag+还原 08/23 22:35
15F：→ tynse71864: 变成 Ag 08/23 22:35
16F：推 LIAR: 我用庄荣辉步骤，泡完Ag+後，泡HCHO的竟然要超过一星期才 08/27 15:26
17F：→ LIAR: 微微变嘿，我还是搞不懂问题在哪。结果只好回去用coomassie 08/27 15:27