作者s992003 (Lord of Ethanol)
看板Biotech
标题[求救] western blot 重下不同二抗
时间Mon Aug 29 07:50:28 2016
各位大大早安，手机发文抱歉
小弟想问的是
小弟用anti his-tag的抗体侦测sf9细胞株
没有进行蛋白质定量，大约使用90% T75的细胞数
使用BCIP+NBT呈色
有加长呈色时间，但是完全没有band出现
但是听说正常来说细胞做anti his-tag呈色都会有东西跑出来（学长姐之前做也是说会有
一些些杂band）
猜测二抗本身有些问题
原因是二抗上次用到剩下约3ul
感觉还可以做个几次
但没想到下次做实验就乾了
小弟拿去稍微离心结果跑出大概30ul...
可能都是水了！？
想问说我这片膜还可以洗ㄧ洗再下一次新的二抗吗
因为如果照理论的话我的样品蛋白跟一抗还卡在膜上
不知道有没有大大这样做过
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1F：→ grox: 可以 只是算是偷懒方法（有次懒得stripping 直接下成功过） 08/29 08:25
2F：→ lail: 可以啊，不过eppendorf从冰箱取出本来就要稍微spin down啊… 08/29 12:52
3F：→ nellnell: Stripping也不用很久阿 大概10-15分钟 再用TBST洗一下就 08/29 13:06
4F：→ nellnell: 可以重新上抗体了 08/29 13:06
5F：→ tynse71864: 直接上就好 第一次没讯号表示根本没抗体黏上去 08/29 14:05
6F：→ jsi: 题外话，"正常来说细胞做anti his-tag呈色都会有东西跑出来" 08/30 22:13
7F：→ jsi: 不是有特定表现His-tag protein的情况才可能会侦测到band吗? 08/30 22:16
8F：→ jsi: 所以一般细胞株侦测不到band应该才是正常的吧? @@? 08/30 22:18
9F：推 FYT0429: 可以二抗直接上，stripping後从blocking开始也行 09/09 15:26