作者gryffin (gryffin)
看板Biotech
标题[求救] 关於利用抗性基因筛选转型珠的问题
时间Tue Aug 30 09:17:19 2016
各位前辈好
小弟最近在筛选转型珠时不时会遇到一个问题
在此提出望有类似经验者可以一起讨论、解答
我将目标基因
以两个序列不同的切位
放在带有抗性基因的质体上
并转型後藉由抗生素培养基进行筛选
但在含有抗生素的培养基上得到菌落後
对 14 颗菌落 Colony PCR 都没有目标基因（Positive control 显示 PCR 没有问题）
同时我有做一个未放质体的转型 Negative control 在抗生素培养基上没有菌落，所以抗生素应该没有问题
那就奇怪了@@
请问有人有相关经验吗
谢谢
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1F：→ blence: 这很正常阿,那颗plasmid没切乾净 08/30 09:58
2F：→ roy047: vector自接, 所以没有insert 08/30 10:05
3F：→ lail: colony PCR false negative，不死心就抽mini再做一次PCR 08/30 12:21
4F：推 lyu0001: 一楼正解 还有insert 切不完全 加太少 也有可能 08/30 16:26
5F：→ gryffin: 可是我有切胶纯化，还是说还是有可能纯化到没切到的吗？ 08/31 00:58
6F：→ Ianthegood: 个人经验是 细菌会做很多乱七八糟我们还不知道的事 08/31 02:33
7F：→ Ianthegood: 看你是想要把你的plasmid做出来 那就多做几次XD 08/31 02:34
8F：→ Ianthegood: 反正你只需要一颗对的 08/31 02:35
9F：→ Ianthegood: 还是你想钻进去研究可能发生什麽事情 也许下一个诺奖 08/31 02:35
10F：→ Ianthegood: 就是你 08/31 02:36
11F：→ Ice9: 用什麽RE？处理程序如何？RE端有多几个bps？ 08/31 06:58
12F：→ gryffin: L大说的也是啦XD 08/31 22:06