作者karine424 (恬)
看板Biotech
标题[求救] 请教石蜡切片破洞问题
时间Fri Sep 9 12:25:47 2016
大家好 第一次发问 已经搜寻过板上的文章 也google过
想请教大家石蜡包埋切片一直破片的问题
最近发现好像比较大块一点的检体或是含有脂肪组织的检体
都容易破片 而且是一个大洞 像照片里这样
https://drive.google.com/file/d/0B3I2jzG2HDoMTHZ6NkEtOTh3bVk/view?usp=sharing
检体是用10%中性福马林固定一天
脱水过程(机器Leica TP1020):
梯度酒精(75% >95% >95% >100% > 100% >100%) > xylene >xylene > wax> wax> wax
接着就石蜡包埋 放冰上约20-30分钟後再进行粗切及细切
有尝试过
(1)换新刀片切(feather的跟leica的刀片都试过)-->失败
(2)蜡块冰久一点-->失败
(3)3um,4um,5um各种厚度-->失败
(4)脱水机的酒精跟xylene全部换新-->失败
想请教大家 是不是还有哪里可以改进?
谢谢大家指教~~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 111.248.171.28
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1473395150.A.813.html
※ 编辑: karine424 (111.248.171.28), 09/09/2016 12:29:13
1F：推 freelight: 请问您泡每个梯度酒精,Xylene 和Wax之间的时间多久? 09/09 13:26
2F：→ freelight: 看起来像是蜡没有进到组织里面 09/09 13:27
3F：→ freelight: 或许可以加长每个buffer浸泡的时间看看~ 09/09 13:27
4F：→ karine424: 每个梯度酒精xylene, wax都是一个小时! 09/09 14:06
5F：→ karine424: 请问如果要延长的话,是每一缸时间都加长吗?30min?1hr? 09/09 14:08
6F：→ freelight: 要看你的组织大小调整 一般来说越大要越久 09/09 17:02
7F：→ freelight: 然後每个浓度可以增加换的次数 让buffer可以完全平衡 09/09 17:04
8F：推 goshr: 最简单的计算方式, 1mm厚度的检体要泡1小时, 09/12 06:12
9F：→ goshr: 然後, 脂肪多的检体, 泡蜡over night会有很大的帮助 09/12 06:15
10F：→ goshr: 但缺点是其他的部分会变更硬, 尤其是猪皮的部分 09/12 06:15
11F：推 yu2012: 1mm厚度的检体要泡1小时,是指的是泡蜡吗？之前的脱水步骤 09/12 08:04
12F：→ yu2012: 正常吗？ 09/12 08:04
13F：推 ayenyayaya: 福马林有问题？ 09/20 14:52
14F：→ ayenyayaya: Commercial buffer 不是完全没问题的 被阴过 09/20 14:53
15F：→ karine424: 谢谢大家 我把蜡块再拿去泡蜡2hr 有变比较好切 10/03 10:34
16F：→ karine424: 因为有时间压力 所以只多泡了2hr 太感谢各位高手~ 10/03 10:35