作者nicolehui (hui)
看板Biotech
标题[求救] shRNA lentiviral infection的问题
时间Mon Sep 12 11:03:11 2016
我是依照RANi core的protocol先用293T cell做病毒液（使用TransIT-LT1系统），接着加polybrene和先前制作的病毒液做shRNA knockdown infection到P19 cell。
一开始都长得好好的，因为我想收细胞做western blot确认是否knock down成功，但是我一使用trypsin後，细胞就飘着不贴了（连作为control的shGFP也是）。也有试过直接收原盘的细胞，但不知道是不是因为polybrene的关系，刮细胞的时候整盘稠稠的。
想请问一下有没有人也遇到同样的问题，或寻求可能我哪里出错了。
ps. 我没有用puromycin筛选细胞
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1F：推 melaleuca: 之前做没有这样的问题耶.. 你的Polybrene浓度放多少啊 09/12 13:03
2F：→ melaleuca: ？ 09/12 13:03
3F：→ nicolehui: 我polybrene的浓度放8ug/ml 09/12 17:17
4F：→ nicolehui: 那你是直接收原盘的细胞吗？ 09/12 17:17
5F：推 darrenyo: 有做过polybrene毒性测试吗? 09/12 17:25
6F：→ nicolehui: 没有耶！但我在infection隔天换新的medium後到trypsin 09/12 17:45
7F：→ nicolehui: 前都还长好好的。这样可能是polybrene的浓度太高吗？ 09/12 17:45
8F：推 darrenyo: 不确定耶..没遇过这状况 只是我之前做 RNAi core建议 09/12 18:28
9F：→ darrenyo: 做之前先做polybrene毒性测试 网站上也有protocol 09/12 18:28
10F：→ nicolehui: 好的！我来做polybrene的毒性测试，谢谢你！ 09/14 10:30
11F：推 cocoHsuan: 去问问你家学长看看吧 09/30 17:27