作者tumourjoke (毒瘤)
看板Biotech
标题[求救] 抽RNA 加75%EtOH离心後无pellet
时间Fri Oct 7 19:04:19 2016
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
小弟用实验室的protocol抽RNA 基本上是phenol-chforoform法
目前做到最後面几步
等待清洗用的酒精挥发後将pellet用纯水回溶 →
测定RNA浓度
由於 260/230大於2.5认为是酒精还没乾就回溶 於是再加入75%EtOH 并且离心
打算重来一次清洗的步骤
到这边还算正常 之前的RNA pellet存在且大小OK
结果离心完发现管子里头没有pellet
大崩溃!!! 求助!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.114.95.203
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1F：→ a90648: 要补盐类啦 不然无法沉淀出来 10/07 20:20
2F：→ tumourjoke: 不是很懂要补盐类的意思 10/07 20:28
3F：推 huuban: 我们没看到pellet都继续做，溶下去就有了XD 10/07 21:20
4F：→ huuban: 一楼应该是指要加十分之一体积的3M NaOAC? 10/07 21:22
5F：→ a90648: 就是楼上说的!! 可以另外去估狗LiCl 10/07 22:20
6F：→ sunorange: 我们都加 glycogen 。比较不会影响後续的实验 10/07 22:41
实验室用的protocol里头有一步骤即是加上1/10体积的NaOAc
不过教导实验的助理没有说明过原理 感谢各位的信息提供!!
※ 编辑: tumourjoke (140.114.95.203), 10/07/2016 23:23:37
7F：推 darrenyo: 借串请问一下 TRIZOL抽的protocol中 倒掉isopropanol後 10/07 23:41
8F：→ darrenyo: 就直接加75%EtOH 不用补盐类的原因是? 10/07 23:42
9F：→ sunorange: 其实步骤中有提到 ，细胞或是组织少的时候 。可以加NaO 10/08 00:03
10F：→ sunorange: AC，帮助沈淀 10/08 00:03
11F：推 Ianthegood: etoh>70%+高盐 盐会把水抢走 让核酸沈淀 glycogen只是 10/08 19:14
12F：→ Ianthegood: 稀释体积比较好pipet 10/08 19:15
13F：→ Ianthegood: isopropanol後的沈淀本身就很多盐 70%etoh反而是要把 10/08 19:16
14F：→ Ianthegood: 太多的盐洗掉 10/08 19:16
15F：推 ararthur: 260/230>2.5是酒精没乾就回溶? 哪里查到的阿? 10/10 13:02
16F：→ ararthur: 核酸溶解度:低盐>高盐;70%EtOH>100%EtOH>H2O 把握这原则 10/10 13:03
17F：→ ararthur: 即可 至於glycogen和linear acrylamide则是替小片段核酸 10/10 13:03
18F：→ ararthur: 和少量核酸增加沉淀机会而已 例如tRNA或oligo等等 所以 10/10 13:04
19F：→ ararthur: 坦若本来就沉淀得出来 加此两项 意义不大 10/10 13:05
20F：→ ararthur: 另外上面提到LiCl 有人说不适合小片段RNA 并可能抑制RT 10/10 13:12
21F：→ ararthur: 所以请斟酌使用 10/10 13:13
22F：→ WinnieDad: RNA和DNA所须使用的phenol pH值也不同，要注意。 10/17 20:46