作者gustpigex (鼻子好像灌太多了)
看板Biotech
标题[讨论] 如何得知膜蛋白在何处被磷酸化修饰？
时间Wed Oct 26 23:40:02 2016
如题，最近想设计实验探讨膜蛋白是在胞内被磷酸化或是运送到细胞膜後才被磷酸化。
请问各位有人看过相关的文章吗或做过相关的实验吗？
目前想到的方法是使用exocytosis inhibitors,再用磷酸化抗体做IF实验观察。 但总觉得使用抑制剂不太好
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 223.136.13.182
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1477496404.A.3C6.html
1F：→ e104582001: 萃膜蛋白&质蛋白做WB? 10/26 23:49
2F：→ e104582001: 膜蛋白中的phos比例较质蛋白增加→在膜上磷酸化? 10/26 23:50
这样好像还是不能确认磷酸化的位置@@
3F：→ e104582001: 仔细想想似乎不行 10/26 23:52
4F：推 darrenyo: 直接用IF看在胞内有没有磷酸化蛋白? 10/26 23:56
有试过了，染到的都在细胞膜上，想到的原因可能是磷酸化後会马上被送到膜上。
※ 编辑: gustpigex (223.136.13.182), 10/26/2016 23:58:03
※ 编辑: gustpigex (223.136.13.182), 10/26/2016 23:59:51
5F：→ blence: 拿掉signal peptide或接个GFP或N-ter tag,那它不上膜？ 10/27 00:03
以前学长有做过接GFP,会影响蛋白的运输，会不会上膜我要再问问他。说不定可以试试看
※ 编辑: gustpigex (61.228.33.252), 10/27/2016 00:29:59
6F：→ xxtomnyxx: 你的蛋白是哪种膜蛋白？transmembrane 还是 GPI？ 10/27 12:45
磷酸化位点在cysosol，蛋白质C-terminus的位置
7F：→ xxtomnyxx: transmembrane 的话是哪种 type? 10/27 12:45
为6次穿膜的膜蛋白，N,C端皆位於cytosol
※ 编辑: gustpigex (223.140.138.61), 10/27/2016 13:33:05
8F：→ xxtomnyxx: 那磷酸化的胺基酸在细胞内还是细胞外？ 10/27 13:35
※ 编辑: gustpigex (223.140.138.61), 10/27/2016 13:35:47
9F：→ xxtomnyxx: 那我会试试加 KKXX 让它 retain 在 ER 再看是否会磷酸 10/27 13:40
10F：推 tynse71864: 想请问不想用抑制剂的考量是什麽? 10/28 22:07
11F：推 GG810424: 做phosphoproteomics,用Mass去测蛋白上的PTM 11/16 12:42