大家好 小弟在实验上需要使用MC/9这株细胞(mouse liver mast cell, IL-2 dependent) Medium为 RPMI1640 + 10% FBS + 10% T-STIM + L-Gutamine + 0.05 mM 2-ME 从ATCC购买後第一次解冻就发现ATCC冻管的存活率偏低 解後第一天观察大约只有20%~30% 之後也是有长回来且生长速度正常 但是目前又碰到同样的问题 在建立cell bank时发现 自己冻存的细胞存活率极低(最高接近10%...很多只有3%以下) 不管使用生长的medium或FBS, DMSO 5%~10%都测试过 试是过冻存前一天更换一半左右的新medium 也试过以前ATCC推荐冻存B lymphoblast的方式(冻存液、渐冻盒预先降温+低温离心) 但情况...没有任何的改善 因为同时有操作其他一般癌症细胞株 冻存与解冻都是正常的 所以冻存系统or试剂应该是没问题才对 在冻存前(冻管进渐冻盒)或是解冻当下算过存活率都很正常(80%以上) 但是隔天就是几乎是全军覆没的情况(也试过50%的旧medium) 有耳闻cytokine dependent的细胞很难冻 但是目前的情况...实在很难接受 麻烦有经验的大家能够提供点建议了<(_ _)> 不祈求能有80%存活率...但希望能有ATCC冻管的水准 非常感谢 --

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