作者lb00202549 ()
看板Biotech
标题[求救] transfection的效率可持续多久？
时间Thu Dec 8 14:03:51 2016
用lipofectamin 2000做transfection来over expression gene，第一次是收48hr的6cm dish量的细胞跑WB，效果非常好，无论是293T或是lung cancer cell都很好。
但是第二次做的时候，条件改为48hr的时候将6cm dish culture放大到10cm dish等待长满後收下protein跑WB，发现完全跟control的表现一样...完全没有over expression...
不知道问题出在哪里...
是不是因为经过一代culture，所以....失效？
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1F：推 sdjk: Transfection送进去的都因为继代稀释掉 12/08 14:28
2F：→ sdjk: 直接用10cm半满transfection? 12/08 14:28
3F：→ xxtomnyxx: 要看你用的细胞还有 vector，以及有没有做 selection 12/08 14:46
4F：→ xxtomnyxx: 建议你用一样的 vector 表现 EGFP，这样你就可以用萤光 12/08 14:46
5F：→ xxtomnyxx: 追踪细胞表现的状况。 12/08 14:47
6F：推 nellnell: 看你描述是transfect 48小时後放大到10cm dish, transie 12/08 18:56
7F：→ nellnell: nt transfect最佳表现是24-48小时, 中间经过一次继代, 12/08 18:56
8F：→ nellnell: 又放两三天等他长满, 效力过了没表现很正常吧 12/08 18:56
9F：推 tynse71864: 我通常30h就收了 最多48h 12/08 19:16
10F：→ untilnow: RTFM 12/09 11:25
11F：推 GG810424: 四到五天都没问题，看plasmid,看gene 类型,跟dish size 12/22 11:39
12F：→ GG810424: 无关 12/22 11:39