作者whatupmen (jia)
看板Biotech
标题[求救] Transfection 的问题
时间Fri Dec 9 00:52:24 2016
各位 前辈们你们好
小弟最近 有做transfection
把一个 带有microRNA的plasmid 转染至癌细胞中,这是实验室第一次做这类的实验，然
後有些疑问想问问大家，我使用的是jetPRIME 的药剂。
我一直有个疑问，reagent：DNA的比例，DNA的单位都是ug，但我的plasmid是用kit的elu
tion buffer回溶，如果抽取plasmid浓度不同如：1000ng/ul 或 200ng/ul，假设同样tra
nsfection DNA浓度都是 1ug ，这样一个加1ul一个是5ul，同样是转染1ug一个细胞要再
多承受4ul的elution buffer(plasmid 回溶)，不知道会不会对细胞产生毒性，还是说没
有差？
也顺便问问各位如果transfection时，plasmid浓度都大概多少？
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1F：→ blence: elution buffer一般都是水或Tris buffer阿 12/09 00:56
2F：→ blence: 如果担心,何不用elution buffer调成浓度一致 12/09 00:56
3F：→ whatupmen: 我後来就有把浓度调成一样，当然plasmid抽出来时浓度越 12/09 01:14
4F：→ whatupmen: 高越好，代表要加入细胞的体积比较少，但想问问各位 tr 12/09 01:14
5F：→ whatupmen: ansfection前，抽plasmid的浓度都多少 (一直担心elutio 12/09 01:14
6F：→ whatupmen: n buffer在细胞含量太高 哈哈) 12/09 01:14
7F：→ a90648: 你就想想水和tris要多少才会造成细胞毒性？ 12/09 12:59
8F：→ xxtomnyxx: 用 mini 和 midi 抽的就算用同样的 buff 调成一样浓度 12/09 15:38
9F：→ xxtomnyxx: ，做 transfection 效率也会有差。如果可以尽量都用 12/09 15:39
10F：→ xxtomnyxx: midi 抽到的 DNA 来做。Mini 抽到的通常没有 midi 纯。 12/09 15:40
11F：→ tynse71864: 我都调成1ug/ul耶 至多0.5ug/ul~ 12/09 18:31
12F：→ tynse71864: 我都抽 maxi 12/09 18:32
13F：→ MDCCLXXVI: elution buffer会是无菌的吗？ 12/10 08:10
14F：→ tynse71864: 会过.22 fil ; kit组附的理论上是 (TE也不太会长东西 12/10 13:08
15F：→ tynse71864: 吧 12/10 13:08
16F：推 GG810424: 抽midi or maxi 1ul 2ug 以上 看下多少再调整 12/22 11:36
17F：→ GG810424: 可以fb 搜寻 G葛格的生命科学小教室 12/22 11:37
18F：→ GG810424: 欢迎来发问踢馆 12/22 11:37