作者lyonalaya (槿花未开)
看板Biotech
标题[求救] NIPAM成胶问题
时间Sun Dec 18 15:09:03 2016
增加第二次失败未成胶的药品用量
先提一下，我不是生医相关科系的，我是机械系QQ
主要是想把这材料拿去应用在其他MEMS部分
可是因为从来没接触过这方面的东西，实验室也没人懂...
所以不知道该问谁Orz
使用的药品有N-isopropylacrylamide、APS、NMBA、TEMED
第一次的比例
N-isopropylacrylamide 1200mg→600mg
APS 26mg →13mg
NMBA 50mg →25mg
TEMED 40ul →20ul
DI water 20ml →10ml
第一次是有成胶的，但是实在是不记得确切的凝胶时间
这次再做，把所有药品减半
丙且想试着提高温度加速凝胶时间
做了两组对照，一组是室温的，一组是加热70度
70度那组因为没加盖所以水分蒸发乾掉了
室温那组...过24小时来看，发现还是液体状态QQ
另外我爬了一下文，看到好像APS受潮的话会影响效果
可是我第一次做的时候，药品里面好像就有结块了(厂商给我的时候就有了)
当时我没想太多就直接用了
除了N-isopropylacrylamide存放冰箱之外，其他药品都是室温保存放在药品柜
厂商给的时候没有特别说要怎麽存放，我就把他当成其他药品一样放室温了
请问到底是我的药品有问题还是配方有问题QQ
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1F：→ lyonalaya: 拜托有没有知道的大大帮忙解救我一下QAQ不一定要一样12/18 19:48
2F：→ lyonalaya: 的药品，相关成胶资料也好12/18 19:48
3F：推 huangsw: APS跟TEMED一起加？ 你有先後顺序吗？12/18 23:39
4F：→ lyonalaya: 有，N-isoprpylacrylamide>NMBA>APS>TEMED12/19 00:05
5F：→ lyonalaya: 有先等粉末溶解完之後再加下一个药品12/19 00:06
6F：推 koala30135: 有mix均匀吗12/19 09:11
7F：→ lyonalaya: 有摇晃搅拌等粉末看不见再继续，第一次跟第二次都是用12/19 13:09
8F：→ lyonalaya: 磁石搅拌均匀的，但是第二次的胶到现在都还没有固化12/19 13:09
9F：→ blence: 在加APS与TEMED时，用磁石搅拌的时间分别有多久？12/19 19:51
APS放进去大概搅拌一两分钟的时间，然後再滴TEMED
10F：推 tz2733: 没作过这种胶 但SDS-PAGE作很多>< 想说我们都是把APS泡成12/19 23:49
11F：→ tz2733: 水溶液(新鲜配或配大量分装冰-20一次解冻一小管) 作胶时12/19 23:49
12F：→ tz2733: 倒数第二个加下去 稍微混匀後加TEMED就赶快注胶 不知你的12/19 23:49
13F：→ tz2733: 这种胶这样处理会不会比较容易凝 给你参考12/19 23:49
请问你们APS粉末都是怎麽保存的Q___Q
我们冰箱没有到-20这麽低温
APS放一般药品柜而已，这样会坏吗
APS泡成溶液是用莫耳浓度算吗？
14F：推 supray: acrylamide会先跟buffer混好 APS先配成10%的12/19 23:58
15F：→ supray: 通常加进去稍微混合一下 10分内就凝了12/20 00:00
16F：→ supray: 这凝胶的速度是不会有等粉末溶解的时间的12/20 00:03
17F：→ supray: 感觉是错过凝胶的timing了12/20 00:04
18F：→ supray: 然後要做较稀的胶 我们只会减少acrylamide的量12/20 00:06
因为第一次做的时候也是这样的，查到这个配方的文献也是说大概要24小时会凝胶
buffer是交联剂之类的吗QAQ？
还是会不会是交联剂变质Orz
另外想请问多少的单体要搭配多少的APS溶液
※ 编辑: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 00:49:02
※ 编辑: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 01:55:49
19F：推 tz2733: APS我们都封parafilm放乾燥箱 为了减少打开次数所以配大量12/20 08:51
20F：→ tz2733: 10%水溶液 分装小管冰-20 冰3个月内应该都还可以用 不要 12/20 08:51
21F：→ tz2733: 反覆解冻(一般冰箱冷冻库大概也可以吧。。。) 12/20 08:51
22F：推 tz2733: 以前每次作胶前开罐新鲜配APS 大概一年多後胶就凝不起来 12/20 08:56
23F：→ tz2733: 了(凝胶时间越拖越久) 你新买的APS应该还没这麽快失效 有 12/20 08:56
24F：→ tz2733: 些结块也还正常 通常都买最小包装的 坏了整罐丢也不心疼12/20 08:56
10%水溶液是用什麽算的QAQ重量？莫耳？
我那时候买上面写98%，这样是还要乘0.98吗Orz
※ 编辑: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 09:08:03
25F：推 tz2733: 我是1gAPS+10ml水这种算法>< 另外可查SDS-PAGE配方 同楼12/20 09:24
26F：→ tz2733: 上提到的 调整胶浓度时不是所有东西都减同样倍数12/20 09:24
好，我再做一批有成功那次的配方试试看，如果没问体应该就是不能减半QAQ
另外，老师昨天说，现在一直没有胶化的液体再多加APS跟TEMED，看能不能让它成胶，这
有可能成功吗→__→？
※ 编辑: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 09:47:43
27F：推 tz2733: 看配方表 好像越低浓度胶的APS跟TEMED要加比较多量ㄟ... 12/20 10:22
28F：→ tz2733: 我也不知道再加会不会凝你可试试 12/20 10:22
看来我的表达能力有问题让大家都误会了QQ
我所有都有减半(包括水)，我以为这样子单体的莫耳浓度是没有变的
29F：→ blence: 原来你的减半是只有药品减半,水体积还是20ml12/20 10:25
30F：→ blence: APS,TEMED用量要维持1/1000,不要更动12/20 10:26
31F：→ blence: 时间过了未成胶的也别用了,失效了12/20 10:29
不好意思让大大误会了，我水的用量也有改变，上次20ml这次10ml
因为想说要维持原配方的浓度，所以大家一起减半这样浓度才会一样
减半的原因是想要做出比较少的胶，因为模具容量没有20ml这麽多
所以把所有东西减半，想说这样可以得到一样浓度10ml的胶
APS跟TEMED的用量1/1000是跟什麽相比@@?水的体积吗?
※ 编辑: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 11:23:30
※ 编辑: lyonalaya (1.163.79.187), 12/20/2016 11:27:54
32F：推 tz2733: 照理说你这样减半应该要ok呀 也许是搅拌扰动到吧 加油罗12/20 23:00
凝胶时不能晃动吗？
我好像等待时除非我不在学校，不然没几小时就会去晃晃看有没有固化
该不会是这原因吧OAO
※ 编辑: lyonalaya (1.163.14.188), 12/20/2016 23:36:59
33F：推 tz2733: 因为SDS-PAGE很快10-30min就凝 加上注入玻璃夹层也不方便 12/21 00:06
34F：→ tz2733: 摇 所以我们会多配些 剩下的放着 如果剩下的凝了(会摇一下12/21 00:06
35F：→ tz2733: 看看) 那胶应该也凝了 没机会一直摇胶 不知一直摇是否会影12/21 00:06
36F：→ tz2733: 响 12/21 00:06
37F：→ blence: 在PAGE中,APS跟TEMED的用量约1/1000是相较於总体积 12/21 00:31
38F：→ blence: 一直去晃动(摇)就不会凝了,所以最前面才问磁石是否搅太久12/21 00:31
39F：→ blence: 另外以PGAE来看,无封闭(保持空气暴露)也会比较慢凝成胶12/21 00:33
想请问一下，相较於总体积1/1000，是1ml应该有1mg的APS吗？
我查网路上SDS-PAGE配方，好像20ml要有0.1ml的10%APS，这样好像没有符合1/1000？
是我算错还是这两个是不一样的不能通用？
另外想问，APS多加对於胶体聚合成胶会有影响吗？
例如太多会不能凝胶之类的
※ 编辑: lyonalaya (42.73.92.25), 12/21/2016 11:01:52
41F：→ blence: 以SDS-PAGE,最常参考的molecluar cloning所提供的比例 12/21 11:59
42F：推 koala30135: APS越多凝越快，用过20%的APS对SDS-PAGE胶体品质没影 12/21 17:58
43F：→ koala30135: 响只是凝很快 12/21 17:58
好，谢谢各位大大的帮助OuO
明天试试看APS泡10%溶液，看能不能顺利凝胶
如果还是不能的话搞不好真的试药品出问题了Orz
※ 编辑: lyonalaya (111.248.4.14), 12/21/2016 21:53:17