作者geltukou (一生一世)
看板Biotech
标题[求救] WesternBlot的Band结果判读?!
时间Wed Dec 21 10:42:27 2016
想请问版友们是否有碰过这样的情况?
目前实验室做Western Blot结果，常碰到这样的问题
操作上大致没有问题，1%BSA配制抗体，稀释倍数依说明书上的指示
说明书上也会标出表现出的band会在多少kDa的位置
但是做出的结果，最明显的band表现，却与说明书标示的位置不符，常常会偏高
说明书上显示为14kDa，此抗体为monoclonal antibody
http://imgur.com/kurneKz
但做出来最明显的band却在20kDa左右，原定的14kDa反而不清楚或根本没有band
http://imgur.com/FV4o4fy
之前思考或许是各家marker的标示位置不同，换过两三家不同的marker仍有相同的状况
并非只有发生在此抗体，已经做过好几个一抗均是如此的结果...
而且也不是只有一家厂商，大部分都是monoclonal antibody....(囧)))
请遇到相关经验的版友能给我们一点意见，
是因为它是monoclonal antibody，基本上就相信它显示最明显的band
或是有其他方式可以确认呢?
谢谢大家。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 120.107.71.57
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1482288154.A.349.html
1F：→ lail: overexprrssion?放positive control？基本上这种位置差蛮远 12/21 12:23
2F：→ lail: 的band我就不相信了，即使是使用单株抗体也一样… 12/21 12:23
我们目前也觉得不能相信差太多的明显band~但是做几次都是这样~TAT
请问常用的positive control是指哪个呢?
※ 编辑: geltukou (120.107.71.57), 12/21/2016 13:02:59
3F：推 GG810424: 有问题请去fb搜寻（G葛格的生命科学小教室）询问，WB真 12/21 17:00
4F：→ GG810424: 的需要多练习与经验 12/21 17:00
5F：→ lail: 看看别人用过那个细胞会很明显表达你要看到蛋白质啊，用它 12/21 17:20
6F：→ lail: 当positive 12/21 17:20
7F：→ geltukou: 好的！谢谢大家回答 12/21 21:44
8F：→ htLiu: 放一组positive control就知道位置了 12/23 15:15
9F：推 icheee: 你的系统里是看 endogenous 的吗？或是 fusion protein? 12/24 03:37