作者jacky255257 (jacky)
看板Biotech
标题[求救] 想请问mmp-9 在Western 的实验
时间Fri Jan 6 11:03:58 2017
各位大大好
小弟已经试了好久
在du145的细胞中
跑western 看 mmp9的表现
可是不同家的抗体似乎抓起来效果都很难抓的感觉
不是没有band 不然就非常非常弱 不然就很杂
不知道有没有大大指点.....
谢谢!!
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1F：→ lail: 有没有考虑做RNA或是gelatin assay(看活性的) 01/06 12:16
2F：推 GG810424: Total protein 你下多少ug 01/06 13:01
3F：→ GG810424: 你有positive control cell lysate 吗？ 01/06 13:02
4F：→ jacky255257: 我下了80ug. 没有control 01/06 13:51
5F：→ jacky255257: 目前还不会弄到RNA跟其他的方法 01/06 13:51
6F：→ lail: 印象中MMP9的western不好做，也有可能是因为分泌出去了 01/06 14:30
7F：推 GG810424: 你google MMP-9 antibody 看到 U937的那张图，想办法弄 01/06 18:03
8F：→ GG810424: 个positive control 01/06 18:03
9F：→ GG810424: 你membrane 是什麽材质的? 01/06 18:03
10F：→ GG810424: 你transfer 多久 什麽电压 还有电流？ 01/06 18:04
11F：→ GG810424: 做几%的gel 01/06 18:04
12F：→ GG810424: 厚度？ 01/06 18:04
13F：→ GG810424: 抗体titer怎麽下？ 01/06 18:05
14F：→ GG810424: 你有问题可以加我FB : Tong Yu Hu 01/06 18:05
15F：→ GG810424: 我可以帮你一层一层剖析问题 01/06 18:05
16F：推 vancent: mmp只有几个可以做WB 01/06 20:25
17F：→ blence: 都能把MMP9讲出来了,却不顺便讲是试过哪些不好用 01/06 23:38
18F：推 GG810424: 我从来没有买过MMP-9 antibody 唷 01/07 00:30
19F：→ GG810424: 实验不用做我也能判断抗体的好坏 01/07 00:31
20F：→ GG810424: 我硕班用过200支以上抗体，这是经验，你可以买abcam 的 01/07 00:32
21F：→ GG810424: 而且我没有必要告诉你答案，我告诉你答案，永远都学不会 01/07 00:33
22F：→ GG810424: ，我是启发式教学 01/07 00:33
23F：→ blence: 我在说原po啦 01/07 00:48
24F：→ blence: 有些人不说基因,是不希望透露研究主题,但目前的没这顾虑 01/07 00:52
25F：→ lail: Abcam的抗体倒不是我的首选，使用经验不佳 01/07 02:07
26F：推 tynse71864: 我也不爱 abcam…偏贵 01/07 09:56
27F：→ blence: Abcam太多OEM,同一支货,卖价必然贵一些,整并後的thermo 01/07 10:46
28F：→ blence: 也在学;不过上面abcam说的兔单株EPR吧? 是并epitomics来的 01/07 10:47
29F：→ blence: 算是自产,品质比较稳定,价格也不贵,应该可以独立出来评价 01/07 10:48
30F：推 virusgg: 不知道genetex跟 cell signaling的抗体好吗? 01/07 18:21
31F：推 machin: 如果没有一定要定量,推做活性测试(gelatin assay)随便查 01/07 19:20
32F：→ machin: paper都有实验方法 01/07 19:20
33F：推 tynse71864: 我也推gelatin assay; 但如果真要定量还是要有抗体阿 01/07 23:19
34F：→ tynse71864: ～ 01/07 23:19
35F：→ tynse71864: 另外抗体购买还是看 citeab或 biocompare比较稳;大厂 01/07 23:19
36F：→ tynse71864: 某些抗体就是特别难用，所以直接找前人引用较安全 01/07 23:19
37F：→ cyc5566: 启发式教学是啥鬼= = 01/08 01:18
38F：推 mandible: MMP 这种东西跑western 和 gelatin assay 定义是不一样 01/09 15:35
39F：→ mandible: 的哦！要看您问什麽问题！ 01/09 15:35
40F：推 lail: 测量也可以用elisa试试看 01/11 19:24