作者kerber56 (kerber)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质透析一直沉淀
时间Wed Jan 18 19:36:27 2017
如题
小弟表现一个蛋白
原本溶於8M urea
进行透析到4M就开始沉淀
到2M 都沉淀差不多了。
用的是PBS+10%甘油+0.1mM EDTA +0.1mM pmsf PH=8的透析液
不把尿素透到0就无法进行下个实验
有哪里可以改善吗?谢谢
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1F：推 Ianthegood: 温度？ 01/19 03:45
4度c
2F：推 huangsw: 你的蛋白有双硫键吗? 01/19 10:01
有 两个
※ 编辑: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 22:59:55
3F：→ Ianthegood: 可以试试室温 有些蛋白怕冷 01/19 23:12
谢谢您 我会试试
※ 编辑: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:04
※ 编辑: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:17
4F：推 huangsw: 如果你起始在8M Urea, 请用re folding的概念去处理 01/20 14:44
5F：→ huangsw: 浓度不宜高, 不同分子间双硫键接起来恐怕也不是你要的 01/20 14:44
6F：→ huangsw: 另外，如果是E. coli表现的, 双硫键有很大机会是错的 01/20 14:46
7F：→ huangsw: 记得多做实验确认一下. 不然投稿会被战翻... 01/20 14:47
8F：推 Ianthegood: 对耶完全忘记你这是refolding 01/20 19:15
9F：→ Ianthegood: 你如果要做biophysics的话 做refolding真的好吗? 01/20 19:16
10F：→ storm780121: 有his taq吗？有的话可以尝试on column refolding 01/21 17:14