不完全相关, 小弟最近也在做protein expression, 多看了很多文献有发现一些很奇妙的变因： 假设菌跟plasmid都对的话, 首先[IPTG]的范围大概会从0.01mM~1mM都有可能是有效范围 我之前的protein在0.05mM的时候表现得最好 再来OD 建议做小规模0.3, 0.5, 0.8三个OD点的induction测试, 有时候菌就是在 某个stage比较喜欢表现某个蛋白 第三温度 长时间低温, 短时间低温, 长时间高温, etc 第四culture size跟摇晃速度 这里就开始很玄了 有时候小管的表现很好, 放大到半公升一公升就怎麽都没有overexpression 如果你是很有动力的科学家, 你就会开始慢慢找变因 如果你是工程师, 你就会set up 50管小管的 然後也有听过induction开始後降速到90rpm结果表现量翻倍的 最後题外话, 如果蛋白怎麽样都表现不出来怎麽办? 可以考虑换host(e coli strain), codon optimisation, fusion partner等策略 真的再不行, 就换yeast或baculovirus吧XD ※ 引述《s992003 (Lord of Ethanol)》之铭言： : ※ 引述《huangsw (Orz)》之铭言： : : 43 : : 前人种树後人乘凉, 但是难免有种歪的时候, 导致後人被压伤, 这在科科界时有所闻. : : 另外, 操作的手法也有可能会造成差异. : : https://goo.gl/zMzalH : : 请看上面这张图, 理想的induction(中文应该是诱导?), : : 应该要可以达到这张图Lane 1 2的样子(未纯化). : : induction本身牵扯到细菌的生长与复制, 意味着可以改的地方也有很多. : : 不仅仅是IPTG和OD=0.5~0.6这两个条件而已, 其实温度也可以改. : : 但是在做这些事情之前, 我觉得还是要先确认一下这个菌株仍有大量表达的潜力. : : 如果没有, 又想把事情做好的话. 那就砍掉重练. : : 先把现在BL21的plasmid抽出来, 定序一下, 确保nucleotide是正确的. : : (如果你找的到DH5alpha的菌株也行, 通常都用这个保存plasmid) : : 然後重新tranform(转形)到DH5alpha与BL21 并且妥善保存. : : BL21的部分, 从transform的涂盘中, 挑选数个候选人(candidate)进行表现量的测试. : : 挑到产量好的, 再去做induction的测试 (搞不好这时候就不用做条件的修改了). : : 先确认有大量表现, 版友才好继续帮你抓药. : : 如果有不懂的地方, 多看看paper也许会看到有用的资讯. : : Good luck. : 谢谢大大们的建议，我已经开始进行有无induction的比较 : 我的认知是如果要增加表现量就是增加induction时间,IPTG浓度,表现温度 : 其他条件的改变(譬如低温长时间表现)只是要避免inclusion body的产生 : 不知道这个想法是不是错的 : plasmid的序列之前已经定过所以没问题 : 然後BL-21挑表现较好的菌这步骤学姊做过，我目前是拿他挑的菌来用(约一年多前，都冰-80) : 取菌方式是用tip沾一点丢入LB，保存的菌瞬间冰回去 : 还是其实菌并不能保存这麽久? : 不过不管怎样如果测试结果真的是无法大量表现 : 小弟会听从建议打掉重练 --

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