作者xy234786 (阿亮)
看板Biotech
标题如何改善蛋白aggregation?
时间Sun Feb 5 20:18:30 2017
我要纯化的蛋白是利用pET21b送入BL21plus去overexpresssion，并利用column去纯化大量的蛋白，此蛋白是阴道鞭毛虫的rubrerythrin蛋白，它是一种铁离子结合蛋白，大小连同his tag前後的residue，大概24kDa，而实验目的是要去结出这蛋白的结晶，分析它的结构，不过，最近发现此蛋白可以大量被细菌表现并纯化出来，然而在後面置换及浓缩蛋白的过程中，发现此蛋白相当容易arregation，很困扰，因为如果纯化蛋白的质及量不好，便会影响後续养晶的成功性，好困恼啊，我只是硕班生，老师就要我解结构???，各位大大，有没有什麽办法解决啊～
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1F：→ milkpa: 本实验室的研究生也都在解结构，没什麽。找一下buffer条 02/05 21:42
2F：→ milkpa: 件、改变induce温度等等，需不需要additive等等，都试试看 02/05 21:43
3F：→ Ianthegood: 看原文expression没有问题 问题在後面处理 02/05 22:10
4F：→ Ianthegood: 怎麽换buffer的啊? amicon, dialysis? 02/05 22:10
5F：→ milkpa: 从破菌开始就可以换了，不一定要死守单一buffer 02/06 00:21
6F：→ milkpa: 从low salt、high salt、super high salt开始，各种添加物 02/06 00:22
7F：→ milkpa: 都行，方法很多，其实搞不好铁离子加下去就解决了 02/06 00:23
8F：推 huangsw: 推楼上, 如果已知会跟离子结合 可以的话, 有一点比较好 02/06 13:09
9F：→ Ianthegood: 喔建议要有plan B喔 如果解不出来要有别的东西可以写 02/06 19:45
10F：→ Ianthegood: 论文XD 02/06 19:45
11F：推 darit: 增加Glycerol的浓度5~10% 或者加长或缩短蛋白长度 02/16 00:51
12F：→ darit: 加2-ME或TCEP对某些蛋白也有帮助 02/16 00:51