43 : 我们家跑WB前会先把sample用分光光度仪，595 nm测吸光值後， : 算好个别浓度，再决定每个well要loading的量。 这边我想请教的是, 你的材料来源为何? 我知道你要跑WB所以一定是下蛋白质. 但是你用595nm 定量的原因是? 是细菌吗? : 别人家是不测吸光值， : 第一次都先直接loading一样多的sample，然後直接跑internal control (tubulin)， : 跑出来的结果去反算sample应该要loading的量， : 所以第二次可能每个well sample量都不一样，但internal control是一样的。 : 虽然乍看之下好像没甚麽大不了，但是总觉得...不够严谨? : 对方的解释是说，他们觉得以internal control为标准就可以了， : 但如果sample个别本身的internal control就有差异了呢? : 还是这已经是可以通用的规则，internal control就能当标准化使用? : 如果已经是通用标准的话我想就接受了，不然还是回来遵循老方法吧... : 希望有人可以跟我讨论，谢谢~ 这边提供一个方向可以参考 常见的internal control 通常都是一些跟细胞含量有关系而非给药与否相关的细胞蛋白. 最常见的就是细胞骨架类蛋白质. 他们这样做有个原因可能是, seeding时, 虽然细胞数接近, 但是细胞的分化生长, 仍可能导致最後每单位体积内的细胞数是不同的, 纵使差异可能不大. 但是WB这种讯号会被放大的实验, 仍可能会出现肉眼可见的差异. 呼应上上一段, 故, 他们采用internal control做为体积校正的参考, 藉此调整下sample的量, 提供给您参考. --

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