作者bill00202000 (handsome)
看板Biotech
标题[求救] 流式细胞仪如何做双染positive control
时间Fri Mar 31 17:36:06 2017
各位高手好，
小弟最近要做乳酸菌包覆胶囊後，模拟人体胃酸测试再用流式细胞仪观察存活情形，染剂
部分是fluorescein diacetate (FDA)和propidium iodide (PI)，
FDA是渗透型染剂，能渗透细胞膜(完整细胞膜)与esterase作用产生萤光物质，
PI是非渗透型染剂，当膜受损或细菌死亡才可穿过膜与DNA结合染色，
仪器是校内贵仪借用操作，管理人员要准备4种control，
分别是未染色(负控制)，两种染剂的单染与双染样品(正控制组)，
小弟比较疑问是要如何做双染的control，因为细菌未处理直接染色，其细胞膜是完整，
PI就无法染色，小弟自己想到的方式是先FDA染色後，加热85度15分钟杀死细菌再用PI染色?
但不知此做法是否会影响FDA的萤光物质，想请教各位高手此法是否可行或是有其他法可
以做的，因第1次碰流式细胞仪和萤光染色，这方面又无人可问
麻烦各位高手给予建议，谢谢
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1F：→ lail: 以前细胞我是用酒精固定，不确定细菌行不行03/31 22:43
2F：推 jabari: 用酒精不就杀菌开洞了 囧a04/01 01:20
3F：推 Ianthegood: 他不是就要开洞吗XD 只怕fluorescin染不上去04/01 05:20
4F：→ a90648: FDA先染之後 fix 後打洞染PI?04/01 19:54
5F：→ a90648: 我比较好奇为什麽要有"两个相反意义"都可看到的正控制组?04/01 19:56
6F：推 lail: PI要染进去就是要在细胞膜上开洞啊...04/01 22:33
控制组是管理人说要准备给他，我也不太清楚，我看paper大多是负控制组和单染正控组
所以做流式细胞也要酒精固定吗？
※ 编辑: bill00202000 (39.12.225.84), 04/03/2017 13:33:46
※ 编辑: bill00202000 (39.12.225.84), 04/03/2017 13:34:26
7F：→ a90648: 看情形，如果只是分析surface marker可以不固定04/03 22:09
感谢各位的回答，小弟会再摸索看看，虽然还没找出何适双染的方法
※ 编辑: bill00202000 (39.12.106.214), 04/10/2017 01:03:24
8F：→ a90648: 我觉得你再跟管理人员确认看看吧!! 双染相反意义的正控组 04/10 13:37
9F：→ a90648: 逻辑上很怪阿!! 都是相反意义了还要同时看到? 04/10 13:37