作者MLSHBen (酷喔)
看板Biotech
标题[求救] 请问有办法可以知道某细胞有无表现某蛋白？
时间Mon Apr 3 02:22:12 2017
如题
想请问是否有办法可以知道某个细胞是否有表现某个蛋白
会问这个问题是因为我碰到下面所述的状况
我目前遇到的情况是transfect某个X蛋白的WT及其mutant form(都带有Flag-tag)到293T cell
用Western Blot压Flag抗体得知都有transfection成功
又知道X蛋白会影响CaMKII及p-CaMKII的表现量
所以想用这同样的lysate压CaMKII及p-CaMKII的抗体看mutant form是否会影响他们的表现量
但好像压不出来
查别的CaMKII的抗体的data sheet好像是293T mock transfection没有CaMKII的band
(会查别的CaMKII的抗体的data sheet是因为原本的抗体的data sheet是用mouse brain lysate)
所以是否就表示293T cell不会表现CaMKII？
所以就想请问是否有办法可以查到某个细胞是否有无表现某个蛋白
就我的情况而言就想知道293T cell是否会表现CaMKII及p-CaMKII？
谢谢！
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※ 编辑: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:25:46
※ 编辑: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:26:38
1F：→ xxtomnyxx: 拿 293T 的细胞做个 RT-PCR 看看？ 04/03 03:03
2F：→ blence: 一般sheet会用mock/transfect是要呈现Ab真的可以认抗原,而 04/03 03:14
3F：→ blence: 不是未表现,明明视觉效果跟观感不佳,但有厂牌偷懒就爱用 04/03 03:15
4F：→ blence: 还有遇到mouse的图时要先确认Ab辨识专一性,别家的难以参考 04/03 03:15
5F：→ blence: 至於标题问题,以array或RNAseq解析数百细胞株expression 04/03 03:21
6F：→ blence: profile的dataset我知道的至少三个,但293T似乎都没被纳入 04/03 03:23
7F：→ tynse71864: 直接换个细胞呢? 如 HeLa或 COS7 04/03 09:46
想请问上面讲的「明明视觉效果跟观感不佳,但有厂牌偷懒就爱用」是甚麽意思？
查ATCC得知293T是human embryonic kidney来的，如果找embryonic kidney是否会表现是否就代表293T会表现？
谢谢！
※ 编辑: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 11:09:14
8F：推 egoweaver: RTPCR看transcription level有没有还有WB跑个positive 04/03 13:26
9F：→ egoweaver: ctrl吧，视情况而定293T不一定是你的实验的良好平台 04/03 13:26
10F：→ egoweaver: 是说你的抗体认得到human protein吗，虽然CamKII人鼠应 04/03 13:29
11F：→ egoweaver: 该有conserve啦… 04/03 13:29
感谢您的建议！
※ 编辑: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 15:38:42
12F：推 lelojack: 拿别人分析MASS的原始资料来看看 04/03 21:39
13F：推 a34021501: 查DNA序列是否有排序过。 04/11 17:48