作者rt87687 (rt87687)
看板Biotech
标题[讨论] PRIMER断裂
时间Wed Apr 19 20:07:33 2017
如题 最近做计画 设计primer 想找SNP的温度
在操作的时候送来的primer有被摔到 想请问primer会断掉吗＠＠
断掉後会有什麽样的结果？
今天跑完PCR後结果是大量的杂band
但是因为我们调的温度也不是厂商推荐温度 所以怀疑也可能只是温度没调对
或是说会是primer加太多吗？
谢谢！
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1F：→ blence: tube摔到不会让prmer断掉,就像溶水後vortex混合也不会碎掉 04/19 20:14
2F：→ blence: 什麽叫做SNP的温度 04/19 20:14
3F：→ rt87687: 我们是测定特定基因的SNP最佳反应的温度 04/19 20:18
4F：→ rt87687: 所以是除非vortex太强烈 不然应该不会是断掉导致杂band 04/19 20:19
5F：→ rt87687: 吗？ 04/19 20:19
6F：→ bob79620: primer多大？不过基本上primer很难断裂吧 04/19 20:21
7F：→ rt87687: 20mer 04/19 20:23
8F：推 aaaazzzz: 杂band多跟PCR设定的条件有关,primer太高也有可能(可是 04/19 20:27
9F：→ aaaazzzz: 没有写如何配,也没人知道是不是真的primer加太多) 04/19 20:27
补上配置的材料
SNP：HER2 rs1058808
总共8个热血
DNA 1ul
Master Mix 10ul
Primer F/R 1ul
ddH2O 7ul
Total 20ul
温度条件（Gradient）：52-60℃
※ 编辑: rt87687 (180.176.97.150), 04/19/2017 20:31:02
10F：→ a90648: 写反映条件时重要的是最终浓度而不是加的体积 04/19 22:20
11F：→ blence: 热血？全血？ 这样还能要求很清晰无瑕的band吗？ 04/19 22:38
12F：→ Ianthegood: sample量/内容没写 primer量没写 program没写 target 04/20 06:31
13F：→ Ianthegood: size多大没写 哪个polymerase没写 是当板友都会通灵 04/20 06:31
14F：→ Ianthegood: 逆 04/20 06:31
15F：推 a10s07: 请楼下观落阴去看一下 04/20 13:52
16F：推 andy6001: 哦哦哦 我感应到了，他的primer告诉我他好痛XD 04/20 15:59
17F：推 satantaco: 如果血液样品没经过前处理 直接做 杂讯很多很正常 04/21 11:29
18F：→ des1005d: 观落阴得知primer断腿了 看到DNA就想黏 04/21 17:03
19F：→ rt87687: Sorry没有讲清楚@@ 血液是已经处理完成DNA了 昨天重做後 04/22 00:20
20F：→ rt87687: 现是primer加太多 04/22 00:21
21F：→ rt87687: Primer确定没有断掉 谢谢版友回覆！ 04/22 00:21