作者cathy50121 (阿希希)
看板Biotech
标题[求救] 4%PFA固定细胞问题
时间Wed Apr 26 12:16:20 2017
想请问各位做过ICC的大大们，
事情是这样的，我们老师要求我在做ICC之前先试试用PFA固定细胞(在tube里)，然後上Flow cytometry来确认PFA固定会不会影响到抗体的binding，所以我刚才就试着用上flow的方式来固定细胞，但是在PBS wash两次之後细胞就消失了，根本还来不及stop
请问用PFA固定细胞是不是一定要贴片的细胞呢？？我不知道问题出在哪里QQ
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1F：→ cyc5566: 我上flow是用酒精固定,不是PFA 04/26 12:55
2F：→ cathy50121: 我们老师想用flow确认PFA固定会不会影响到抗体binding 04/26 13:03
3F：→ cathy50121: ，确认之後才可以做ICC 04/26 13:03
4F：→ tz2733: 细胞就消失是什麽意思?肉眼在tube看不到pellet吗? 应该只 04/26 15:04
5F：→ tz2733: 是离心次数多了 流失细胞使细胞数变少而看不到 且PFA固定 04/26 15:04
6F：→ tz2733: 似乎会使细胞变小而更看不到pellet 但硬作下去上机还是有 04/26 15:04
7F：→ tz2733: 机会看到细胞的... 只是要试为何不就直接用ICC试? 04/26 15:04
8F：→ a90648: 我全血有用过PFA, acetone和Glutaraldehyde都固定没问题 04/26 15:05
9F：→ lail: 肉眼看不到但是可能还是有细胞 04/26 15:26
10F：→ cathy50121: 我也想问我们老师为什麽要我用flow上QQ 04/26 15:48
11F：→ cathy50121: 请问全血如果用福马林对血球会很伤吗？？ 04/26 15:49
12F：→ cathy50121: 等等去上机看看，希望开奖成功 04/26 15:49
13F：推 Ianthegood: "formaldehyde对细胞很伤吗"??? 所有fixation都是直 04/26 16:28
14F：→ Ianthegood: 接把细胞杀死并且保存某种特性啊 pfa主要是morphology 04/26 16:28
15F：→ Ianthegood: 你的protocol是什麽? 04/26 16:29
16F：→ cathy50121: 我这次上flow是先用FACS回溶後离心，加同体积的pfa冰 04/27 13:02
17F：→ cathy50121: 上固定15分钟，再离心後用pbs洗两次，过程全部在tube 04/27 13:02
18F：→ cathy50121: 内，洗两次後就看不太到细胞了所以没有洗第三次，也没 04/27 13:02
19F：→ cathy50121: 有stop，就直接染色然後上机 04/27 13:02
20F：→ Ianthegood: 离久一点啊 fix後会比较强壮 04/27 15:36
21F：→ cathy50121: 喔喔好的！那转速需要提高吗？？我是用1800rmp 04/27 18:03
22F：→ Ianthegood: 在没有rotor information的情况下rpm一点意义都没有 04/28 00:03
23F：→ Ianthegood: 请报g值 04/28 00:03
24F：→ Ianthegood: 先离久一点看看 不够再加速 04/28 00:04