作者qmiragep (Mirage)
看板Biotech
标题[求救] MC3T3-E1 骨母细胞贴附问题
时间Wed May 3 20:05:14 2017
本鲁目前刚接触细胞培养
最近在实验室养了"MC3T3-E1"这株细胞株
Medium 使用的都是文献上以及参考中文文献的配方(基本上都一样)
Flask也是用康宁贴附型细胞专用的(75cm2)
目前遇到一个小瓶颈，
就是利用0.25%的Trypsin-EDTA铲起细胞，
细胞密度在"七成"时铲起，
却只有三成细胞有被铲起来，
试过用10%Trypsin-EDTA得到一样的结果
因为细胞算是年轻的细胞，
部分排除细胞老化的可能，
在此跟版上大神们求救><><
有无能将(活)细胞铲起至少85%的方法
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1F：→ e104582001: 拍盘 05/03 20:47
2F：→ qmiragep: 拍过了，而且不小力 05/03 21:06
3F：→ raiyu: 我用0.05%的trypsin也都还ok 因为是很久以前养过的不太记得 05/03 21:48
4F：→ raiyu: 所需处理的时间 不过应该没有太难搞所以没有特别印象 05/03 21:49
5F：→ raiyu: 建议 可以先将飘起的细胞先收起来 再加trypsin作用第2次 05/03 21:50
6F：→ raiyu: 就会很听话了 不建议硬拍 细胞会"断手断脚" 05/03 21:51
7F：推 cyc5566: 我都把T75压上去vortex 对强壮的cell line很好用 05/03 23:03
8F：→ qmiragep: 我试试看这些方法QQ 05/03 23:34
9F：→ qmiragep: 似乎还是失败。。QQ 05/06 00:05
10F：→ raiyu: 那你要不要补充一下你的作法 让大家帮你看看 05/06 21:52
11F：→ raiyu: 或是找前辈看你操作 毕竟隔空抓药有困难 05/06 22:00
12F：→ raiyu: trypsin回温太多次失效了?? 05/06 22:03
13F：推 joseph103331: 有些难缠的细胞株可以用Trypsin在37度作用个2~5分钟 05/08 22:23
14F：→ tz2733: 有先wash过再加trypsin吗? 05/10 18:56
15F：推 ararthur: PBS wash一次不够 有没有wash第二次 05/11 14:35
16F：→ ararthur: 再不行就直接上细胞刮勺 05/11 14:36
17F：→ qmiragep: 非常感谢以上诸位的帮忙>< 目前已经成功了 谢谢=D 05/20 22:05