作者lyonalaya (槿花未开)
看板Biotech
标题[求救] 改变凝胶速度及APS、TEMED用量问题
时间Thu May 11 16:40:39 2017
又来求救！(跪
读硕班真的比想像中的困难很多QQ
想请教凝胶相关问题
因为实验需求所以希望拉低室温中凝胶速度，以加热的方式进行局部凝胶
简单来说就是希望室温中凝胶速度很慢，但是如果拿去加热的话又可以一下子就凝胶
现在的问题是，如果要调整凝胶速度，应该改变APS的量还是TEMED的量?
还是应该两个一起变动?
目前都是只有改变APS的量而已
另外，由於我手脚慢T^T所以在想说能不能把单体跟交联剂混合的溶液先滴到我要成形的
模具中，再於模具中加入APS及TEMED?
这样等於模具中的APS、TEMED没有经过搅拌，是否会因为浓度不均而无法凝胶?
3 4 5 6
┌────────────────┐
NIPAAm(单体)｜1.200g 0.600g 0.600g 0.300g ｜
｜ ｜
NMBA(交联剂)｜0.050g 0.025g 0.025g 0.013g ｜
｜ ｜
10%wt APS ｜200uL 50uL 30uL 15uL ｜
｜ ｜
TEMED ｜40uL 20uL 20uL 10uL ｜
｜ ｜
DI water ｜20ml 10ml 10ml 5ml ｜
└────────────────┘
凝胶时间 <5min 5min 30min 6min
上面是目前做过的测试，一直都是改变APS，但突然想到TEMED才是促进剂
是不是其实我应该改变的是TEMED呢
--
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※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1494492042.A.CE7.html
1F：推 jabari: 该改变的是房间冷气的强度
咦，冷气没有很冷，大概26度
一般室温而已
05/11 17:38
※ 编辑: lyonalaya (114.137.168.175), 05/11/2017 17:47:58
2F：→ biingru: TEMED05/11 18:33
所以我APS的量应该回归第三次的量，然後调整TEMED比较好吗？
3F：→ Ianthegood: temed是initiator 可以最後再pipet到已经倒好的胶里05/11 18:53
4F：→ Ianthegood: 面 但可以想像这样不会太快05/11 18:53
5F：→ Ianthegood: 理论上照光会加速吧没记错的话05/11 18:54
咦，initiator翻译不是应该是起始剂吗OAO还是我英文烂...
那APS要在倒之前先加好并搅拌均匀，倒好胶後再个别滴TEMED？
※ 编辑: lyonalaya (114.137.168.175), 05/11/2017 19:08:38
6F：→ raiyu: 我们家坏掉的APS跟你换 让你40min都不凝喔~ (大误)05/11 19:45
别这样QAQ我只是希望他慢一点凝而已，不能完全不凝
话说理论上加热是可以加速凝胶的吧？
※ 编辑: lyonalaya (114.137.168.175), 05/11/2017 19:48:52
7F：→ raiyu: I大+1 TEMED最後加05/11 19:54
8F：→ blence: 只加APS其实就会凝,只是非常久(天),但只加TEMED完全不会凝05/11 21:33
9F：→ blence: APS维持总体积百分之一就好,改TEMED到万分之一以下试试？05/11 21:34
看完B大的回答，突然觉得我前几组实验好像都走错方向了〒▽〒
下次实验照B大建议的试试看
※ 编辑: lyonalaya (59.127.61.190), 05/12/2017 00:28:02
10F：推 rasaze: 你的TEMED加这麽多难怪凝很快XD05/12 08:58
11F：→ Barolo: 这几个东西的作用不是在做胶的第一天就该搞懂了吗?05/13 08:30
12F：→ Barolo: 现在念硕班已经这麽简单了喔?05/13 08:30
对不起，自从高中後就没碰化学了〒▽〒
机械系没修化学QAQ不太晓得这方面相关知识要看哪本书比较好Orz
13F：→ tz2733: 楼上 原po是机械的啦~ 生科不会的话生化老师都要哭了吧 (05/13 18:56
14F：→ tz2733: 结果好多老师擦泪......) 05/13 18:56
感谢T大说明QAQ
所以像是聚合反应凝胶这类相关知识应该借什麽书来看比较好〒▽〒
※ 编辑: lyonalaya (59.127.61.190), 05/13/2017 20:36:25
15F：推 tynse71864: 一般的生技实验课本就会有了 或直接喂狗有详细教学05/14 01:54
16F：→ Barolo: 你google 丙烯醯胺 temed aps 就有中文资料了 05/15 12:36
17F：推 mosu0714: 原po人也太好，某楼那种留言还愿意道歉05/16 23:29
18F：→ Barolo: 楼上的发言令我万分讶异！ 硕班作实验前搞懂基本原理05/17 00:55
19F：→ Barolo: 这种第一天就开始要求的东西竟以成奢望！05/17 00:57
20F：→ blence: 我觉得对机械系用生科应该会理解的认知去要求是蛮不合理的 05/17 02:23
21F：→ blence: 换个角度想,硕士做PAGE时不是用NIPAAm,都是想过原理的吗？ 05/17 02:25
22F：→ blence: 在顺便问一个我也不懂的,为什麽这里NIPAAm与NMBA用24:1 05/17 02:28
23F：→ blence: 可是实验是只会用19/29/37.5:1,有知道不用24:1的学理吗?05/17 02:29
24F：推 jabari: 未了解原理就作实验 是现在学生的通病...没办法05/17 18:13
25F：推 jabari: b大的问题应该跟cross linker含量有关, 至於沿用19,37.505/17 18:21
26F：→ jabari: 我个人推测是因为这几种比例已经有很多资料 要除错比较 05/17 18:21
27F：→ jabari: 简单 24:1应该也可以用 但是跑起来的效果无法保证 05/17 18:22
28F：推 mosu0714: 硕班最重要的不就是要训练出这些观念？ 愿意学会发问才 05/17 18:28
29F：→ mosu0714: 才是重点吧？05/17 18:29
30F：→ mosu0714: 现在他不懂, 你讲了他懂了学会了,那他还是烂学生吗？05/17 18:30
31F：推 jabari: 能问当然是好事 但是跨领域的确得先学好要作事物的基础05/17 18:54
32F：→ blence: 连j大已经说明24:1以及NIPAAm并非惯用的条件了,也还认同上 05/17 20:10
33F：→ blence: 面认为原po的实验可以轻易google解决的观点吗？ 05/17 20:10
34F：推 jabari: 应该说 大家直觉 会来这个版的应该都三类的...05/17 23:03
35F：推 Ianthegood: 原po为什麽用1:24啊?05/18 00:23
咦，大家不要吵架啊
我的比例是从其他人的论文里面找到的
因为老师一开始是希望我先重现论文
所以之後我才没有特别去改变单体跟交联剂比例
没有先搞清楚药品作用确实是我的错
因为我主要是想把它拿来应用在其他方面
所以觉得我只要做得出来就好了
就像是会用公式解题就好了原理证明并不用一定要懂
不过现在看起来只会用好像还是不够的
会去再多找相关资料看
这个应该读化学还是生技相关课本啊〒▽〒
※ 编辑: lyonalaya (36.228.53.59), 05/18/2017 00:58:34
36F：→ blence: 当然是化学,生技看到这些只会想到"跑胶"用途05/18 01:09
可是化学有分有机化学无机化学还有高分子化学Orz
我很久之前曾经找过一轮，可是完全看不懂啊(跪
难道我要整本从头啃一轮QQ
37F：推 joseph103331: 我比较好奇实验目的是什麽? 那些比例影响的是跑胶05/18 02:45
38F：→ joseph103331: 起来的样子, 为何要室温慢而要加热才做咧?05/18 02:46
我希望应用在bimorph双层结构上面，想做热致动器
然後希望加热凝胶是因为希望可以透过使用micro heater局部加热的方式定义图形
所以希望室温几乎不凝胶，但是加热又可以很迅速的凝胶
这样才可以在有加热跟没加热的地方出现区别，而定义出我想要的图形
话虽如此，但是总觉得很难啊〒▽〒
※ 编辑: lyonalaya (36.228.54.117), 05/18/2017 09:19:00
39F：→ Ianthegood: 真的可以用acrylamide做吗XD 你aps跟temed加下去整片05/18 16:13
40F：→ Ianthegood: 胶就一定会凝啊05/18 16:13
所以希望室温跟加热可以有区别啊
这样加热部分固化，没加热部分没固化
结果今天实验还是失败了
明明TEMED已经减少到1uL，还是三分钟就凝胶
这次照B大说的APS百分之一，TEMED万分之二（pipet最小就1uL)
而且很奇怪的，TEMED滴下去那区就变真空一样T^T
※ 编辑: lyonalaya (140.115.65.158), 05/18/2017 16:44:11
http://i.imgur.com/bgt6uyQ.jpg
附个失败照给大家笑笑〒▽〒
完了我觉得我毕业遥遥无期
顺便有一点不太懂，为什麽做出来的胶有透明跟白色呢
是跟凝胶速度有关系吗
※ 编辑: lyonalaya (140.115.65.158), 05/18/2017 16:50:06
41F：→ blence: 我说的是10% APS用百分之一，也就是20ml胶体含20mg APS05/18 17:03
42F：→ blence: 不过如果你真的用20mg APS还3分钟凝,我也不知道怎麽改了05/18 17:04
对的，不过我没做这麽多，只做5ml
5ml胶体含5mgAPS
说凝好像也不对，因为是烧杯的混合液凝，试片上的却没有凝
我觉得我乾脆TEMED另外加算了
等我把烧杯里的混合液滴到试片上再个别加TEMED好了Orz
※ 编辑: lyonalaya (140.115.65.158), 05/18/2017 17:18:14
43F：推 jabari: 你的APS是不是iAPS? 潮到出水的那种 orz05/18 18:55
咦，可是我的问题是胶凝太快
如果APS受潮不是会无法凝胶吗
还是胶的颜色跟APS有关系
※ 编辑: lyonalaya (42.72.197.44), 05/18/2017 19:10:04
44F：推 lunarblue: 是该先搞懂原理，但是话可以好好说，人家是上来"求救"05/18 19:41
45F：→ lunarblue: 的，自己有这方面知识的话，可以提供他方向请他再去查05/18 19:43
46F：→ lunarblue: 即可05/18 19:43
47F：推 Ianthegood: 我是建议你不要单吊acrylamide 另外试几个polymer acr 05/18 23:34
48F：→ Ianthegood: ylamide我是不太乐观 05/18 23:34
NIPAAm跟acrylamide不一样吧OAO
我记得全名是N-isopropyacrylamide，是一样的吗？
老师希望先测完这个不行再换材料QAQ
※ 编辑: lyonalaya (36.228.53.59), 05/18/2017 23:44:02
49F：→ joseph103331: 局部加热不是会有扩散的问题吗?05/18 23:38
是指热毛细力的扩散吗？
这个要等我先把完整薄膜做出来再说T^T
※ 编辑: lyonalaya (140.115.65.158), 05/19/2017 12:40:04
50F：推 tynse71864: 太直觉没发现原 po的胶另有他用 orz 抱歉05/20 00:10
咦，不用道歉啊，大家提供的建议都很有用啊
如果我有幸顺利毕业一定是有大家的帮助的原因
※ 编辑: lyonalaya (36.228.60.25), 05/20/2017 11:47:02
51F：→ tz2733: 有个想法 你的试片胶都直接大面积接触空气? 可是我们作WB 05/22 12:57
52F：→ tz2733: 胶时是注入两片薄玻璃的窄缝隙里 其实接触空气面很小(甚 05/22 12:57
53F：→ tz2733: 至可说无) 不知道接触空气面积大会不会是你的胶凝很快或 05/22 12:57
54F：→ tz2733: 有真空洞(?)的原因 加油~ 05/22 12:57
的确是大面积接触空气没错，可是这部分条件没办法改变〒▽〒
顶多就是我滴到试片上以後，用玻璃盖住上方QQ
因为实验需求问题，所以只能这样
不过接触面积这部分，我之前好像依稀有看到某个网站提到是因为TEMED在空气中很容易
氧化(?)失去作用?
详细的内容记不太清楚，我再去找找资料，我之後实验改成不加TEMED了
有真空洞问题应该跟接触面积没关系XD
因为很明显空洞是我滴下TEMED後产生的
发现还有人来回应，那我也来更新实验状况>w<
最近一次实验，按照上面大大的建议，把APS量改回10%wt胶体量百分之一
所以2ml胶体加10%APS 20uL，然後不加促进剂
有解决烧杯里的混合液太快凝胶问题，接下来是加热加速试片上的混合液凝胶
不过通常都是加到试片上的混合液乾掉Orz
虽然周边有凝固，可是却不是完整覆盖试片的薄膜，目标是形成完整薄膜
所以正在考虑如果完全不加促进剂，只加大APS的量，然後利用加热提供能量加速凝胶
不知道可不可行
APS是提供自由基开始聚合反应的，如果APS浓度增加，混合液里面有够多自由基
再藉由加热加速聚合反应，也许可以不需要加促进剂就凝胶
也可以达成我的目标，室温下不凝胶但加热却又可以快速凝胶
当然也有可能是我的美好妄想而已〒▽〒
※ 编辑: lyonalaya (140.115.65.158), 05/22/2017 13:46:15
※ 编辑: lyonalaya (140.115.65.158), 05/22/2017 13:50:58
55F：→ Barolo: 也许你该试试其他自由基提供者 加热未必能有效的促使APS 05/23 04:15
56F：→ Barolo: 释放自由基 我是觉得既然你的研究是希望能做出对热有反应 05/23 04:16
57F：→ Barolo: 的凝胶 而聚合反应你又掌握了 就是 单体+自由基=聚合体 05/23 04:17
58F：→ Barolo: 那单体不动的情况下 则应去寻找是否有对热灵敏的自由基源 05/23 04:18
59F：→ Barolo: 从你的实验结果看来 APS对热并不灵敏 05/23 04:19
好的，感谢B大提供方向>W<
会先试着提高APS浓度同时找找看有没有其他热灵敏的自由基提供者
感谢大家帮忙提供意见！
※ 编辑: lyonalaya (140.115.65.158), 05/23/2017 15:37:03