作者xy234786 (阿亮)
看板Biotech
标题[方法] tricine gel
时间Thu Jun 1 18:32:24 2017
我的实验是想要跑出Trichomonas vaginalis中六个isoform 之rubrerythrin蛋白，大小
分别是21kDa,19kDa,22.1kDa,23kDa,22.2kDa ，老师说可以跑tricine-gel这种胶来分出
各个isoform， 请问大家有跑过这种要分出分子量相近的实验吗？，想要清楚配方以及要
注意的细节
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1F：推 july81212: 只有1D可能分不太出来吧 连SEC都会overlapping 的大 06/01 20:14
2F：→ july81212: 小 不考虑2D吗 06/01 20:14
3F：推 july81212: 15%胶 60V慢慢跑试看看 之前是分15-19kDa 4个isoform 06/01 20:19
4F：→ Ianthegood: sec本来解析度就不是太高啊 可能要跑capillary? 06/01 20:21
5F：推 tynse71864: 我的蛋白(~16-19kda)有4个isoform, 在 sds page跟 tri 06/02 13:26
6F：→ tynse71864: cine gel结果都分的出来;同1F跑15%gel 跑胶速度正 06/02 13:26
7F：→ tynse71864: 常 06/02 13:26
8F：→ xy234786: 感谢大家 我试试看 06/03 12:31
10F：→ xy234786: 请问一下 为什麽感觉两个sample跑的速度不一样 然後到 06/16 14:21
11F：→ xy234786: 下半部的时候 marker的band也变的有点歪斜 我这个胶是 06/16 14:21
12F：→ xy234786: 不是一层8% 第二层10% 第三层16.5%的tricine gel跑的( 06/16 14:21
13F：→ xy234786: 老师要我这样做) 06/16 14:21
14F：推 tynse71864: 三层应该不是问题 ; 我记得 tricine gel的sanple体积 06/22 18:26
15F：→ tynse71864: 不能太大 (一般建议10以下) 06/22 18:26
16F：→ tynse71864: 下方 Mr歪代表你旁边 land该处蛋白太多了 挤到隔壁 06/22 18:27
17F：→ tynse71864: 的跑道 06/22 18:27
18F：→ xy234786: 我为了避免互相挤压 分开load了，但跑出的结果还是分不 07/24 19:20
19F：→ xy234786: 我为了避免互相挤压 分开load了，但跑出的结果还是分不 07/24 19:37
20F：→ xy234786: 开也，顶多就只有一条band，老师说他以前做实验连50Da 07/24 19:37
21F：→ xy234786: 都分的开，我怎麽分不开@@ 07/24 19:37
22F：→ xy234786: 老师是跟我说第一层跑10mA,第二层15mA,第三层25mA，这 07/24 19:43
23F：→ xy234786: 样条件正确吗？ 07/24 19:43
24F：→ xy234786: 楼上t大你当初是怎麽跑的呢？，可以跟你要详细protocol 07/24 19:50
26F：→ xy234786: 时间... 缓冲液配方等等另外老板一直说要用Horfer SE28 07/24 19:50
27F：→ xy234786: 0电泳设备跑才分的开 你也是用这设备跑的吗？ 快毕不了 07/24 19:50
28F：→ xy234786: 业了 希望赶快跑出来 07/24 19:50