作者saphina5545 (sammilololo)
看板Biotech
标题[求救] 脂肪酸如何溶解在培养液???
时间Sat Jun 10 11:30:03 2017
大家好, 目前我正在做细胞实验
实验的内容是要用"加了脂肪酸的培养液"养细胞
我们所用的脂肪酸有oleic acid(OA)和palmitic acid(PA)
OA的部分还好,在medium的溶解度ok
问题是在palmitic acid
我们是先用与PA相同浓度的NaOH当作solvent来溶解PA
在这个步骤PA都能够完全溶解在内
而因为是要喂细胞吃,所以在配置成working solution之前
要先把PA和 BSA conjugate在一起,以模拟在生物体内uptake脂肪酸的形情
但问题来了
这个BSA一开始也是要溶在medium里面
而PA一旦碰到medium就立马析出
怎麽弄都弄不散也溶不了
我也找了很多的reference
有人说可以用DMSO
但是我的实验刚好不能用DMSO......
然後因为我已经尽力去溶解它了 medium还是呈现混浊状
我不知道他的极限是不是就只能这样了??
因此想请问板上的各位
你们有遇过类似的实验吗????你们都是怎麽解决的呢????
真的很想赶快解决这个问题啊~~~~不然细胞都不能养TT
谢谢各位~~~
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1F：推 joseph103331: 不能用DMSO的原因是什麽呢? 06/10 13:28
2F：→ saphina5545: 因为我的实验室要看发炎激素的变化 06/10 14:41
3F：→ saphina5545: 之前有听学长说DMSO会抗发炎(?) 不晓得有没有听错 06/10 14:42
4F：→ saphina5545: 所以担心会影响我的实验结果 06/10 14:43
5F：→ saphina5545: 还是其实影响没那麽大呢 06/10 14:43
6F：推 yuasa: PA的最终浓度多高是重点。会在media里析出的话，0.1%的dmso 06/10 15:15
7F：→ yuasa: 其实也没有任何帮助。我的经验是你要让PA跟BSA慢慢地conju- 06/10 15:18
8F：→ yuasa: gate，最好能放在55度的水浴两小时(in NaOH solution)。但 06/10 15:20
9F：→ yuasa: 然後跟media混合时，要慢慢一滴滴地滴下去同时摇晃混匀。即 06/10 15:22
10F：→ yuasa: 使如此，因为PA水溶性真的不好，不太可能用到高於1 mM的浓 06/10 15:24
11F：→ saphina5545: 我conjugate时的PA浓度是2mM 所以是要先降低PA的初始 06/10 15:28
12F：→ saphina5545: 浓度吗? 我最终要使用的浓度是500uM就好 所以是一开 06/10 15:29
13F：推 yuasa: conjugate时的浓度可以更高，因为是在硷性溶液里，温度够高 06/10 15:30
14F：→ yuasa: 的话其实溶得很好，500 uM的话我觉得要做到澄清(只有一点点 06/10 15:31
15F：→ yuasa: 浊)是完全可以的。BTW你BSA最终浓度是1%吗? 06/10 15:32
16F：→ saphina5545: 了解!谢谢你 那请问最後的working solution 06/10 15:32
17F：→ saphina5545: 我BSA和 PA的浓度是1:6 06/10 15:33
18F：→ saphina5545: 是需要最後把BSA调到1%吗? 06/10 15:36
19F：→ saphina5545: 不好意思 可能回的慢 我还不太会用ptt的介面QQ 06/10 15:38
20F：→ saphina5545: imgur.com/b4GfTe7 06/10 15:42
22F：→ saphina5545: 图片上的已经是woring solution了 这样算清澈吗? 06/10 15:44
23F：→ yuasa: 看起来可以再澄清一点，我有寄站内信给你了 06/10 15:45
24F：→ saphina5545: 我回信了唷~ 谢谢你!! 06/10 15:47
25F：推 tynse71864: 曾经遇过一样的问题 XD 06/11 18:51
26F：→ tynse71864: 最後是把 FBS拿掉就解决了 06/11 18:52