作者nnn79 (大头)
看板Biotech
标题[求救] 石蜡切片脱蜡後掉片很严重
时间Tue Jun 27 13:25:02 2017
大家好
第一次发文
排版不好请见谅~
我是用小鼠大脑的石蜡切片
要做IHC
切完片tissue的形状还很正常
但是在 Xylene => 酒精 的脱蜡後就脱片非常严重
好一点这样
http://imgur.com/hJpkVOH
惨一点就会这样
http://imgur.com/a/jirM6
就算没有脱也会有点裂
用了很多方法都没办法解决
请大家帮帮忙~
Condition：
sample：4%甲醛灌流後，泡在甲醛中overnight，送学校的组织中心脱水和包埋
切片前将石蜡放在冰上约30min
切片厚度：5um
玻片:matsunami frontier FRC-11 (网站上说coating MAS)
展片：约45度的自来水
烘片：放在烘片机上overnight (约45度)
~
脱蜡：
烤片：65度,10min(也有过65度,1hr,但没差很多)
Xylene(2*10min) => 100%酒精(2*2min)
=> 90%酒精 => 80%酒精 => 70%酒精(各2min) => PBS(3*2min)
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1F：推 Bows: 我这样不会掉片，反而是煮的时候会皱掉，看起来是片子的问题06/27 13:49
所以是技术的问题罗 QQ
2F：→ schmitt: 用有coating的玻片06/27 13:55
3F：→ schmitt: 烘完要看还有没有水在中间,捞切片的时候要注意06/27 13:57
4F：→ schmitt: 再去跟玻片厂商确认有没有送错玻片(以前发生过)06/27 15:17
感谢～我问看看
5F：→ REIDO: 我有时煮沸的水泡会打掉组织06/27 19:01
我还没到煮沸就掉片了 QQ
6F：推 santimental: 可以考虑烤片O/N看看06/28 15:40
65度O/N吗？
7F：→ aj1139: 好奇问，以脑这种脂质含量高的组织来说，会不会选用06/28 20:44
8F：→ aj1139: APS coating的玻片黏附性会比较高呢？ 06/28 20:45
好像有听说APS和PLL比较适合？
但我们家还有好多MAS的 QQ
※ 编辑: nnn79 (223.138.98.28), 06/29/2017 10:40:54
9F：→ sdshow: 玻片的效期也要留意，过期了COATING效过变差 06/29 12:05
10F：推 yfw: 单看玻片上最右边的组织 感觉脱水没做好.. 08/07 13:16