作者REIDO (NEET)
看板Biotech
标题[求救] 请问collagen的western用UREA会比较好吗？
时间Tue Jun 27 14:57:24 2017
我用一般的RIPA跑collagen，虽然也能跑，但效果不好，要loading很多，RIPA厂商给的配方如下。
0.5M Tris-HCl, pH 7.4, 1.5M NaCl, 2.5% deoxycholic acid, 10% NP-40, 10mM EDTA
後来我用UREA，GAPDH差不多，但UREA的collagen明显多很多，但是用UREA问题是离心後很容易有鼻涕，
BCA定量也要注意干扰。加上我也要跑其他蛋白，有些protocol有提到用酸溶的不晓得会不会影响其他
蛋白。
请问一般如果同时要跑collagen和其他蛋白的western，有特别建议用UREA或甚麽成分的lysis buffer吗?
如果真的要用UREA，那个鼻涕是染色体吗 ？要如何去除那个黏黏的鼻涕状沉淀？
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当你选了一间新餐厅，发现没想像中的好吃的时候，你下次愿意去吃另一间食安有问题的，
当作给新餐厅老板的一点抗议吗？
当你发现新买的饮料不好喝，你下次愿意去喝化粪池的水，当作表示对饮料商的不满吗？
当你宿舍舍友管机歪又罗嗦，你愿意搬去和强暴犯住一起，表达对原本舍友的不满吗？
当你发现小孩还不会讲话，只会哭很烦，你会选择把这个小孩丢到孤儿院，再生一个看会不会安静点吗？
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1F：→ Ianthegood: benzonase 06/27 16:05
2F：→ REIDO: 在UREA内不会死掉吗？ 06/27 16:09
3F：→ REIDO: enzyme不会被UREA或 detergent给破坏吗？还是要哪时候加？ 06/27 19:01
4F：推 joseph103331: 你可以细胞多收一点,取一部分出来用Urea粹,其他用 06/27 19:22
5F：→ joseph103331: 平时的方法即可 06/27 19:22
6F：→ williamyang: 可以用sonicator来破坏DNA 06/28 04:09
7F：→ REIDO: 有人知道台大医院有哪个共研有sonicator吗？ 06/28 23:32
8F：推 tynse71864: 6共试试？ 06/30 01:02
9F：→ storm780121: 加loading dye後煮久一点再离心看看 06/30 06:27
10F：→ REIDO: 疏水性蛋白有些不是不建议煮吗？collagen有没有这种限制？ 07/05 00:02
11F：→ REIDO: @tynse71864:感谢，我明天去问 07/05 00:03