作者VincentYan (VincentYan)
看板Biotech
标题[求救] 跑10kD以下的蛋白，推荐何种SDS-PAGE
时间Mon Jul 24 14:59:43 2017
请问版上的各位大大
小弟我有一个蛋白(peptide)的分子量约5-10 kD之间，尝试很多种Tris-glycine gel，E.
g. 自制的16%或预铸8-16% gradient gel (GE的，但已停产)，但都一直跑不出来，dye f
ront始终停在10 kD就不能再跑下去了(有用小分子量的protein marker，<10 kD marker
跑得出来)，後来发现原因可能是胶的分离范围在10kD已是极限了(推测)
最近想改试Invitrogen NuPAGE 4-12%，搭配MES buffer，根据官网(
https://goo.gl/uRa
BjV)表示: 分离范围最小可到3.5 kD
不晓得有没有版友试过此预铸胶，可以分享意见，或是推荐跑10 kD以下蛋白的方法
感恩不尽><
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.4.190
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2F：推 Ianthegood: 分子量小就不要跑gradient阿 precast 12%跑15kda很ok07/24 15:40
会跑gradient是因为同时还有其他>50 kD蛋白被表现; 跑15 kD ok, 但我要看的是10以下的啊
※ 编辑: VincentYan (140.112.4.208), 07/24/2017 15:58:51
3F：→ aj1139: 自己配18%的啊 07/24 17:23
4F：→ Ianthegood: 12%可以分10kda以下没问题啦 如果你50k以上也需要trso 07/24 19:41
5F：→ Ianthegood: lution就跑两张呗 07/24 19:41
6F：推 tynse71864: 16% dye front会卡在10k吗 (思 07/25 01:10
7F：→ tynse71864: 10以下真有必要可以跑 tricine gel 07/25 01:11
8F：推 alaric: 有用错dye? 07/25 01:16
10F：推 yfw: 13.5 or 15% 另外要考量sample种类与抗体品牌浓度 08/07 13:06
11F：推 yfw: 还有 要看的蛋白是在核质膜？这也可能是跑不出来的原因 08/07 13:08
12F：→ yfw: 不一定是胶的%数问题 08/07 13:09