作者pring (pring)
看板Biotech
标题[求救] ELISA 结果相反
时间Tue Aug 1 23:26:18 2017
最近在做ELISA 出现了阳性血清阴性 阴性血清阳性的结果
（阳性血清为之前攻病毒所得来的 所以非常确定它是阳性；
阴性为同一只动物攻毒前的所搜集的血清）
我做的方式为
(1) coating三种不同的蛋白 （一样的浓度 2ug/cc) 4度C overnight
自己纯化的病毒蛋白A、自己纯化的病毒蛋白B、浓缩全病毒
两者纯化的蛋白都是用HEK细胞所表现的，
A蛋白为soluble protein 取其上清液做纯化
B蛋白为membrane 取其细胞 并用lysis buffer 过filter後纯化
纯化方式也都一样使用
使用resin (TALON Superflow）binding
透过高浓度的imidazole elute蛋白出来
(2)blocking 1hr, RT
(2)血清稀释的倍数(一抗）也都一样 1hr, RT
(3)二抗稀释的倍数也一样 1hr, RT
(4)呈色剂也是一样的条件
自己纯化病毒蛋白A 与 浓缩全病毒的结果 为正常
但是自己纯化病毒蛋白B 却出现了相反的结果
想请问大家有相同的经验过吗？或是我该做什麽样的调整?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.231.135
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※ 编辑: pring (140.112.231.135), 08/01/2017 23:34:32
※ 编辑: pring (140.112.231.135), 08/01/2017 23:46:53
1F：→ lail: 只做了一次吗? 08/02 00:44
pring:重复做了很多次 也试过不同的阴性及阳性血清
※ 编辑: pring (140.112.231.135), 08/02/2017 01:28:22
2F：→ Ianthegood: data永远是对的 08/02 06:01
3F：推 joseph103331: 相反是指都很低, 但阴性高 阳性低吗? 08/02 16:13
4F：→ pring: 是指考虑nonspecific binding吗？ 08/03 00:17