作者a0976134 (带蚂蚁散步)
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标题[求救] Mycoplasma 和 Black Dot 细胞污染差异
时间Fri Aug 4 14:37:24 2017
先前进行细胞株培养时 有曾经用过Hygromycin筛选细胞
之後以 Complete medium with 10% FBS and 1% P/S 培养
但最近该细胞株却有污染的情况发生
但症状与Black Dot 和 Mycoplasma 污染的情况很像
我个人判断依据是：
Black Dot : 存在於胎牛血清内之物质 高等规格级别之胎牛血清不常见
在高倍率下能以肉眼看到在细胞间有小黑点在点与点之间移动
而并非只是原地打转（有可能是细胞碎片或是杂质)
Mycoplasma : 症状轻微时肉眼无法辨别 但严重时细胞间有黑色颗粒分布
细胞培养液底部会有沙状物质出现 但培养液不变色
两者污染严重时 都会影响到细胞生理现象
但若是现象轻微时 也能透过每天勤换medium
和多次DPBS清洗的步骤改善此现象
想请问两者的依据是否是靠此判断 ?
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已知目前市面上已经有贩售Mycoplasma Removal Agent的产品
大概处理时间需要2周 是否处理完後 此细胞就可以进行细胞实验 ?
至於Black Dot 由於目前似乎都是建议靠多种高浓度抗生素筛选
也有人建议说 遇到此类型污染就直接丢掉
想请问各位有在做细胞操作的人 大多都是怎麽去处理的?
先感谢各位前辈告知
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※ 编辑: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 14:40:54
1F：→ honey823: (1) mycoplasma应该无法用一般显微镜看到 (2) 丢掉吧 08/04 14:50
2F：→ a0976134: mycoplasma 轻微看不出来 但严重时培养基底部有沙状物质 08/04 15:07
※ 编辑: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 15:47:58
3F：推 pichia: PCR 或是dapi染看看，这样猜也太不科学了 08/04 17:36
4F：推 liumang: 我们实验室的学长姐说 他们经验上很难清除 08/04 22:50
5F：→ liumang: 我指的是Mycoplasma 当下杀完後用KIT测是没有了 但过阵 08/04 22:51
6F：→ liumang: 子又会出现 当然不能排除是其他地方污染 导致重复感染 08/04 22:51
7F：推 hsnuyr: 用过杀mycoplasma的药但是移除後约一周又会测到 问过原厂 08/06 00:58
8F：→ hsnuyr: 表示那是正常的 原厂建议养在low dose的药物内或是定期清 08/06 00:58
9F：→ hsnuyr: 除 所以後来买的到的细胞我都直接丢了 除非stable clone 08/06 00:58
10F：→ hsnuyr: 才建议用药定期处理 严重的mycoplasma污染沙沙的比较像cel 08/06 00:58
11F：→ hsnuyr: l debris 至於药处理完能不能做实验我觉得要看实验而定 08/06 00:58
12F：推 yfw: 经验谈基本上这类中奖 就要丢了 没可能杀乾净的 08/07 12:55
13F：推 HaGa5566: 之後培养可试试看Invivogen的Normocin，搭配PS效果应该 09/05 18:43
14F：→ HaGa5566: 不错 09/05 18:43