作者andy44 (BIRD <(O)3)
看板Biotech
标题[求救] 细胞污染解决
时间Sun Aug 13 18:11:56 2017
as title
目前实验室的细胞实验
断断续续污染了快两三个月
虽然前一阵子有比较缓解
但最近又开始有灾情出现
先说污染类型
用肉眼看明显可以看到 medium变成粉红色
然後里面有白色的沙沙状的东西
如果用高倍显微镜(x40)可以看到小小的黑点点在动
之前实验室已经有用过的解决方法
1.laminar flow里面所有的东西都用酒精跟抗菌剂擦过然後照UV(hipa半年前才换过)
2.incubator也全部用酒精跟抗菌剂擦拭在照UV,并且把hipa换掉
---------猜测------------
之前查到有些人说这种污染是在小牛血清里面可能会有的东西
不过我们的血清是跟GIBCO购买的高级血清照理来讲应该不会出问题
另外PBS因为都是在配完灭菌後就会把它放到laminar flow里面照UV然後再使用
而且也会先检查有没有悬浮物才会使用
TE都是跟厂商买来自行加入灭过菌的PBS所以机会不高
其实常常困扰的问题是同一批分的细胞
有一盘有另一盘却没有orz
我自己认为的部分可能是
1.灭菌锅炉的效益变差,因此可能血清瓶灭菌不完全
不知道现在有哪些方法可以测试灭菌炉的效果??
2.在laminar flow同一间房间有养几只实验鼠
不知道会不会是跟这些老鼠有关?
写了好多感谢耐心看完的大大
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.114.100.192
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1F：→ lail: 每个人操作都会吗? 08/13 19:19
每个人都有,只是没遇过同一天一起爆发的,通常都是今天是A明天是B
2F：推 weico: 灭菌釜可以跟厂商或医材行买灭菌指示剂；还有我一直很怀疑 08/13 19:42
3F：→ weico: 把器具晒在操作台的UV真的有很好的杀菌效果吗，毕竟照射死 08/13 19:42
4F：→ weico: 角很多 08/13 19:42
大大是说灭菌胶带吗??就是如果灭菌时有达到标准就会有黑色痕迹出现那个??
5F：推 leptoneta: 实验鼠...... 08/13 20:58
※ 编辑: andy44 (140.114.100.192), 08/13/2017 21:17:31
6F：推 quitman: 灭菌指示剂好像是指一种杆菌的芽孢 市面上好像有卖~ 08/13 21:29
恩恩了解我会去问问
7F：推 elelith: Water bath 有清吗 08/13 23:29
water bath 其实满脏的所以後来都没人warmXDD
8F：推 datro: 感觉是霉菌/酵母菌类 但是 通常动物不会跟细胞放一起 08/13 23:54
OK了解
9F：推 joseph103331: 灭菌胶带不是正式的指示标的，不要相信 08/14 00:37
10F：→ joseph103331: 材料怀疑的话拿去培养测看看就对了，不过大多数时 08/14 00:38
11F：→ joseph103331: 候都是操作的问题比较多 08/14 00:38
测污染这件事我们都会做
之前是发生刚配完的medium
就会有污染
所以要用前都会测过
不过最近是
一开始没污染
可是用了一两个礼拜
就有污染产生...
染後侧medium里面就有污染了...
操作问题好像真的无解
不然就是每个人在操作的时候旁边都要有人在盯可能会出错的地方
感觉就像全部打掉重练
12F：推 LIAR: 霉菌/酵母菌很大颗应该很好认吧？小黑点我还是怀疑细菌。 08/14 01:07
13F：→ LIAR: 之前实验室鬼打墙，我最後直接去别的实验室干一整套的耗材， 08/14 01:07
14F：→ LIAR: 从medium到pipet到dish，全都用别人的，慢慢抓原因。 08/14 01:08
恩亨了解,跟别的实验室借器材来用好像还没试过
感谢大大的建议
15F：推 zeroking0519: pipet是不是很久没有拆开来清洗消毒？ 然後是不是 08/14 10:01
16F：→ zeroking0519: 很多时候会不小心冲上去？ 08/14 10:01
pipet好像真的重来没有清过LOL
再看看要怎麽清
感谢大大建议
17F：推 MDCCLXXVI: 液体灭菌有拉长时间吗？ 1L要灭45分钟 08/14 10:23
这我可能要问问学长
不过我自己灭都是40分钟,那我之後再拉长好了
18F：推 untilnow: 放个6well 放medium 其中一格滴几滴灭菌pbs 08/17 00:47
19F：→ untilnow: 或其他怀疑污染液体 08/17 00:48
20F：推 vLkdSc: 有图片吗？ 08/17 05:35
http://imgur.com/8dgJ5wv
http://imgur.com/my65KST
照片超不清楚sorry但是可以看出最上面那盘明显跟下面的颜色差别
在视野下就是有非常小非常小的黑色点点在游动
21F：推 aj1139: 遇过跟你一模一样的情况，後来发现实验室队友很雷，他一做 08/17 07:01
22F：→ aj1139: 实验就大污染。每次有污染我都拿Lysol把所有可能的地方擦 08/17 07:02
23F：→ aj1139: 过一遍，能够灭的就拿去灭。如果你怀疑medium或FBS，直接 08/17 07:04
24F：→ aj1139: 分装一些放在桌上，变混浊就中奖了。 08/17 07:05
这种情况真尴尬
我也会怀疑某些同实验室很雷的人
可是也没办法叫他不要做实验
逼他自己用自己的incubator跟laminar flow....
※ 编辑: andy44 (140.114.100.192), 08/18/2017 11:31:33
25F：推 joseph103331: 打掉重练不会比较慢喔,大家有共识的话互相监督很好 08/18 11:41
26F：→ joseph103331: 雷人就是欠电,请学长去电,然後盯着他做实验 08/18 11:42
27F：→ joseph103331: 多找一些人花点时间培训实验室人员技术可省不少时间 08/18 11:43
28F：→ joseph103331: medium有污染几乎就是操作有问题了XD 08/18 11:43
29F：→ travelmat: 灭菌胶带应该只是，灭菌指示的一种，可以买高级一点的 08/22 08:58
30F：→ travelmat: 测试，GMP厂都会用那个做验证 08/22 08:58
31F：→ Eyer: 生物指示剂，里面是嗜热芽孢杆菌之类的孢子；请厂商提供适 09/03 18:33
32F：→ Eyer: 用湿热或乾热灭菌的指示剂。 09/03 18:33
33F：推 ksksks: 操作台的uv很弱而且穿透力差... 09/11 16:52
34F：推 grayqueen: 目前市面有检测灭菌釜功效性的QC实验唷！可以去买来试 10/03 18:54
35F：→ grayqueen: 试。 10/03 18:54