作者es77823 (77823)
看板Biotech
标题[求救] 24well 细胞越种越少
时间Tue Sep 5 23:50:22 2017
想请教版上各位学长姐们
我是实验室新手
每次种24well 时细胞都会越种越少
步骤如下：
1.将细胞用trypsin，离心再加入1cc medium，後去数细胞
2.种在24well，每1well 30000颗细胞
3.会把算好的细胞数加到内含25cc medium的tube
4.1 well加1cc
我试过用auto pipet 跟 pipet，但每次种24 well完後做mtt时，最後几格(大约8格左右)的well读出来的od值都会下降很多
连control 那格都下降很多，所以排除是加药的问题
想知道这个问题该如何解决，谢谢!!!
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1F：→ e104582001: 细胞沉淀很快，每次在加都要混匀，不然会越加浓度越低 09/05 23:53
2F：→ es77823: 我每次吸6cc，都会用auto pipet再pipetting，然後再吸6cc 09/06 00:02
3F：→ blence: 我会猜是你药物处理有换到medium,较後面处理的细胞乾死掉 09/06 02:19
4F：→ blence: 如果是分的数量差异,MTT之前就看出来了,不必测OD才发现 09/06 02:20
5F：→ blence: 另外24well用到0.5ml就好,液面太高,对生长也没好处 09/06 02:21
6F：→ es77823: !!!!原来是这样，会再修正我的做法的，感谢B大的帮忙 09/06 04:31
7F：推 aj1139: 综合上面的建议加一点我的做法：细胞混好在tube之後，每 09/06 07:17
8F：→ aj1139: 加完一盘整个tube摇一下混匀，然後再加下一盘，前提是单 09/06 07:17
9F：→ aj1139: 手开关盖要练好、tube要绝对乾净 09/06 07:17
10F：→ aj1139: 方便说是什麽细胞吗？ 09/06 07:18
11F：→ es77823: 因为在练习阶段，所以都是学长姐们的细胞，种过3种不同的 09/06 14:33
12F：→ es77823: 细胞，但结果都是细胞数越来越少 09/06 14:33
13F：推 joseph103331: 种细胞後 做实验前 都养成看显微镜的习惯比较好 09/06 20:24
14F：→ joseph103331: 24 well应该还可以透过日光灯看细胞密度 不过前提 09/06 20:25
15F：→ joseph103331: 种得要够匀 09/06 20:25
16F：→ aj1139: 做完都会看显微镜检查 +1 09/06 21:12
17F：→ tynse71864: 而且24很难摇匀哈哈 09/07 19:43
18F：→ es77823: 嗯嗯会再试试看的!!!!谢谢各位帮忙 09/08 00:54
19F：→ LIAR: 24well我都用1ml耶？一方面避免蒸散的影响，也避免phase 09/10 23:11
20F：→ LIAR: contract中间旁边差异太大。 09/10 23:11