作者jazzinfuture (CoM)
看板Biotech
标题[求救] Pichia 的培养基混浊
时间Sat Sep 23 01:19:28 2017
第一次发问 请各位鞭
现在正在使用甘油代谢路径的噬甲醇酵母菌做蛋白质培养
培养基是BYPG / BMG
分别材料是
BYPG
yeast ex 5g
pepton 10g
glycerol 10ml
phosphate buffer ph6.0 50ml
诱导培养基
10x YNB(YNB + ammonia sulfate)
phosphate buffer ph6.0 50ml
500x biotin 1ml
10ml. glycerol
甘油都是分开灭 biotin等冷了加
但是不知道是什麽样的问题 冷却之後都会沉淀东西出来 上显微镜看起来不像菌
起初以为是甘油高温灭菌有问题 就用.22 过滤 还是会有沉淀析出
以前都诱导的出东西 现在都诱导不出来
请大神开示m(_ _)m
-----
Sent from JPTT on my HTC_D826y.
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 180.217.134.31
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1506100770.A.4AC.html
※ 编辑: jazzinfuture (180.217.134.31), 09/23/2017 01:20:53
1F：→ silverberry: YNB 也是用灭的吗? 是加在其他成分里灭的吗?09/29 10:29
2F：→ silverberry: "以前都诱导的出东西" -> 和现在是做不同的蛋白质吗?09/29 10:30
表现的蛋白质都不变
YNB 1.7g + ammonium sulfate 5g 和 phosphate buffer 丢一起灭菌 甘油另外跟水混合灭
菌 冷却之後倒一起混合这样
3F：→ silverberry: 那凶手应该是 YNB10/02 12:09
4F：→ silverberry: 所以诱导的时候培养基就没有 yeast extract 了?10/02 12:10
5F：→ silverberry: 也没有 peptone 了?10/02 12:11
6F：→ jazzinfuture: 对10/02 20:48
7F：→ jazzinfuture: 所以... ynb坏了?10/02 20:48
8F：→ silverberry: 之前的经验是也不是不能用，不过从很营养的培养基10/06 10:37
9F：→ silverberry: 换成很不营养的培养基诱导，有什麽特殊原因吗?10/06 10:37
10F：→ silverberry: 这样菌长的还好吗?10/06 10:38
啊哈哈 推文追踪没追到大大回覆
因为前人是遵照expression kit 的说明在走 後面条件也都有找好
是怕菌的代谢路径走到glucogenpath 就不能行诱导(说明书有原因)
去年学长在诱导的时候都有诱导出来
今年初我做两轮都有东西 不过活性慢慢的减少 就觉得大事不妙然後开始除错
菌长不长的好应该不是问题
因为要诱导的条件OD600>=60
※ 编辑: jazzinfuture (180.217.170.154), 10/10/2017 02:46:34