作者feather2 (飞羽)
看板Biotech
标题[讨论] cloning PCR check
时间Mon Oct 23 15:35:57 2017
相信很多版上的大大使用过利用点菌PCR的方式来确认cloning
我会特别选用大於200bp 约500~1Kbp的长度
因为我觉得200bp的长度常常会不确定是不是正确的
另外胶图上也会确认长度对不对 尤其时浓度够不够
长度不对的机率蛮低的 但是浓度太低 其实是伪阳性的机率会有一点高
但是最近被问到利用qPCR来做 这样更快 也不用跑胶
只是这样的话 除了要改用很短的设计 也不能确定产物长度 浓度也较不好认定
不知道各位大大有没有相关的经验或是想法
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1F：推 ABULA666: 你的实验目的应该是要挑到正确的DNA片段吧？用qPCR去筛 10/23 15:57
2F：→ ABULA666: 显得你工具用错地方，我个人觉得不如先用cloning PCR再 10/23 15:59
3F：→ ABULA666: 直接选有机会送定序，顶多送定序前先用限制酶确认，价钱 10/23 16:00
4F：→ ABULA666: 一定比qPCR试剂低，也不会用到额外的仪器 10/23 16:01
5F：→ feather2: 是cloning PCR 只是我们家有qPCR机器 就被要求用qPCR来 10/23 17:59
6F：→ feather2: 跑cloning PCR 比较快而且不跑胶 听起来好像也没错 10/23 18:00
7F：→ blence: 这叫colony PCR,前面就有个专家#1Ll7Pwcd 10/23 18:12
8F：→ blence: 真好奇是怎样的人给出这种建议 10/23 18:15
9F：推 ABULA666: 感谢楼上纠正，看文随手打时总觉得怪怪的XD 10/23 18:45
10F：→ xxtomnyxx: 你知道普通 PCR 和 qPCR 的价格差了多少吗 XD 10/23 21:50
11F：→ xxtomnyxx: 况且用 qPCR 来做 colony-PCR.....如果用 SIBR Green 10/23 21:52
12F：→ xxtomnyxx: 根本没办法分辨是 self-ligation 还是正确 insert 的 10/23 21:53
13F：→ xxtomnyxx: 产物吧？用 TaqMan 的话....我保证你实验室会破产 XD 10/23 21:53
14F：推 untilnow: 建议你查一下两者价差 10/23 22:30
15F：推 joseph103331: 定性的实验用到定量的技术本身就怪了，定量是要花 10/24 00:36
16F：→ joseph103331: 很多钱钱的 10/24 00:36
17F：推 aaaazzzz: 看到b大提的#1Ll7Pwcd，忍不住点进去看看，内容真是太棒 10/24 10:28
18F：→ aaaazzzz: 了！希望常常看到几位先进分享优质的文章 10/24 10:30
19F：→ feather2: 感谢大大的回应 我也觉得很怪 但上头这样问我 我也… 10/24 13:15