作者raylie9093 (Ray)
看板Biotech
标题[求救] IHC品质不稳定
时间Thu Oct 26 21:37:49 2017
大家好，目前遇到的ＩＨＣ状况品质容易不稳定
染色出来可能同一批有些结果很漂亮很正常，但也会有很差的（操作的都是临床检体）
同个control出来的深浅区块不ㄧ致，有片子的很浓、有些很淡
或者同sample的结果深浅有落差、染上的区块会有点不太一样，是有猜可能切片的切面可能也会影响到这件事
大致上的步骤如下
1.Deparaffin(in Xylene) 3次 2min
2.Hydration 100%Alc-95%Alc-75%Alc-H2O-H2O 各1次 2min
3.Antigen retrieval in autoclave 10-15min
然後用Kit，大致上是：
1.peroxidase 5min
2.blocking 5min
3.primary antibody 室温1hr
4.post-antibody 10min
5.polymer 10min
6.DAB 5min
7.Hematoxylin 5min
不知道是不是哪个环节该调整或者操作时该注意的，可以做出稳定的品质？
如果Deparaffin 和 Hydration的时间加长 （变2min30sec是否足够？) 可以改善吗？
但是会不会因此容易掉片（用coating片操作前也烤过）
还是有其他的可以给我一点建议？谢谢！
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1F：推 johanjohan: 1.检体是否固定不良？2.有无使用防水笔，避免实验过程 10/26 22:10
2F：→ johanjohan: 乾掉。 10/26 22:10
1.formalin的固定还是烤片？
2.有用防水笔圈，也有注意乾掉的问题，但是怎样才算真的乾掉？
因为我在圈检体的时候，大致上就是擦乾到想圈的范围，然後用防水笔圈
大概看检体上是有薄薄的水分，还是动作要再快一点？
因为我又怕范围擦不乾防水笔晕开
其他的实验步骤就尽量让片子保持水份的状态
※ 编辑: raylie9093 (180.217.235.218), 10/26/2017 22:26:48
3F：→ abcam: IHC的片子 即使是positive片子，也不会颜色深浅都一致。 11/04 17:38
4F：推 cv5754515: 依我的经验是实验条件以及kit的效果问题，试着peroxdia 12/27 11:06
5F：→ cv5754515: se 20min 12/27 11:06
6F：推 cv5754515: Blocking 37度烘箱 30min。DAB 呈色时在显微镜下观察 12/27 11:08
7F：→ cv5754515: 变化，不一定要五分钟，看情况调 12/27 11:08