作者steve42125 (DrunkenBlue)
看板Biotech
标题[求救] H1299 养Sphere都会贴盘
时间Sun Oct 29 00:39:44 2017
各位好
今年刚升硕一进实验室
最近老板要我养H1299的Sphere去做後续的实验
因为以前也有学长姊用过这个细胞株养sphere所以我也依照他们的protocol操作
但是试了三四次总是贴盘
以下是我的操作步骤 希望大家能提供我一些可能我没注意到的事情或着可以改进的线索
1.Parental cell以Trypsin打下後以Complete culture medium中和离心
2.将medium去乾净後以1 ml PBS resuspend後再离心
3.去除PBS後以Serum free sphere medium resuspend後以1*10^4/2ml/well种进6 well
4.之後每隔4天补sphere medium 500ul/well
但是通常在种下去的4天後 也就是准备第一次补medium时用显微镜先确认状况
就发现有满多细胞已经贴盘了 并且漂着的细胞数量变得满少的
有试过改变一些步骤
包括：多用PBS wash一次、
不以PBS wash，而是以sphere medium wash一次,
离心去除再加sphere medium
希望有人能够分享一点成功的经验和撇步
一直失败很苦恼.....
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1F：→ xxtomnyxx: 你用的是 for cell culture 的 6-well 吗？换成 petri 10/29 00:47
2F：→ xxtomnyxx: 试试看？ 10/29 00:47
不好意思 petri 是指那种6cm一般养细胞的plate吗?
因为我们实验室养sphere都是用6 well 之後收了做qPCR或Western
我们实验室的6 well 好像就只有两种 一种是low attachment 一种是一般的
我会再去看看...
3F：推 moon0126: 换成non-treated well dish试试看 10/29 01:01
我们实验室的6 well好像是non-treated的了....
4F：推 joseph103331: 请教一下养sphere是什麽意思? 纯粹好奇> < 10/29 01:37
cancer cell如果有CSC的特性的话 可以从一颗细胞分裂出其他细胞聚集成一个微球体的型态
用这种培养的方式来筛选出CSC(不知道有没有歪掉 请帮忙补充XD)
5F：推 qiet: plate有用对? 要用low-attachment plate这一类的吧 10/29 01:45
plate应该是没有用错... 我们实验室确实是有low-attachment的plate 但是是给其他种细胞用的
因为之前学长姐也是用一般的6 well就养的出来了所以我也没用那个....
※ 编辑: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 16:29:55
※ 编辑: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 16:41:16
6F：→ blence: 如果以前的学长姊成功养过,直接去寻求解决比较有效 10/29 16:40
7F：→ blence: 不过通常会发问可能是学长姊不在lab,protocol就不能尽信了 10/29 16:40
8F：→ blence: 上面说的就是看着low_attached不用这部分 10/29 16:43
了解.... 或许我可以考虑直接找老师讨论看看 谢谢你...
※ 编辑: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 17:23:35
9F：推 datro: 不用low attach养出来的 我觉得比较像是长太满成球的 10/30 20:29
10F：推 QuTarh: 我们之前用ultra low dish养得出来或许你们也可以试试看 11/03 12:59
11F：推 abcam: Greiner,BD, Corning 这些大牌子 都有这些特殊盘 问问价格 11/06 22:55
12F：推 exosome: 这些特殊盘都蛮贵的，不彷自己coating poly-HEMA 试试 11/10 00:56
13F：推 ko363630: 自己co的效果都不好，买commerical 的比较方便，至少省 11/14 07:11
14F：→ ko363630: 时省麻烦 11/14 07:11
15F：→ bj59420: 细胞有养歪吗？重新解冻新的一批试试看？ 11/19 21:21