作者jacky781 (葛乐)
看板Biotech
标题[求救] 脂肪酸分析问题
时间Wed Dec 20 16:31:49 2017
本人在实验上遇到很大的问题,是关於脂肪酸分析的部分.
先简单说明一下我们实验室采用的方法:
内容主要是测取动物组织(主要是脑部)各中脂肪酸的百分比含量,采用的方法是
Bligh and Dyer method, 第一天会先使用Methanol : Chloroform=2:1的溶剂来磨碎组织
以进行脂肪酸萃取并去除掉蛋白质等部分,第二天加1.8% NaCl离心取下层并用氮气吹乾後,
会添加Methanol : Dichloromethane=3:1和acetyl chloride(催化剂),水浴1小时以进行
甲基化的步骤,水浴完等样品回到室温後再添加K2CO3(中和掉催化剂)和hexane後离心,
最後取上层的hexane再以氮气吹乾,并用少量的hexane回溶,分装到小瓶後上机.
我们实验室用的是GC-FID, 采用的设定皆可让我们要分析的脂肪酸甲酯(FAME)顺利分离,
而DHA是我实验的重点.
我现在遇到最大的问题就是我不管怎麽做DHA的百分比就是偏高,前人和同时期实验室人员
做的都是较合理的状况(因为是用peak area来算百分比,所以照理来说我实验结果的peak
area每个都比别人做的低的话,DHA的area也是要低,但DHA就是和其他脂肪酸不一样,
反而比别人的高,这就造成我的DHA百分比暴增),这问题已经困扰我很久了,和老师讨论後也找不出问题点到底在哪?
这种问题还是本实验室第一次遇到的,同样的sample重复做结果也没比较好,想请问这里
是否有脂肪酸分析大师有没有什麽其他建议呢?
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※ 编辑: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:32:37
※ 编辑: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:33:30
※ 编辑: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:33:50
※ 编辑: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:34:07
1F：推 leptoneta: 你peak选取是否正确? 在学长姐面前做一次看看 12/20 19:07
2F：推 as862437: 打一只 DHA 标品 看是不是rt, 不知道你图谱复杂程度为 12/21 01:12
3F：→ as862437: 何，有无对比先前前辈的 特徵peak 回推位置？ 12/21 01:12
4F：→ jacky781: peak的RT是对的,有另外去跑GC-MS检查过 12/21 13:57
5F：→ jacky781: peak identification也由老师本人亲自看过,目前也找不出 12/21 13:58
6F：→ jacky781: 原因到底为何 12/21 13:58
7F：→ jacky781: peak的位置有由标准品和GC-MS确认过,和别人做的Rt也相 12/21 14:00
8F：→ jacky781: 同,但DHA算出来的结果就是偏高 12/21 14:00
9F：推 as862437: 有没有试过找一个 稳定量的脂肪酸当内控制 算算看？ 12/21 18:24
10F：→ jacky781: 请问您是说internal standard吗,我们有加 C13:0和C21:0 12/21 20:12
11F：推 as862437: 喔喔 对的 那就是了 12/21 22:35