作者small3chiu (山邱)
看板Biotech
标题[求救] 细胞培养
时间Sat Dec 23 15:21:16 2017
手机排版，请见谅
大家好，小弟最近刚接触细胞培养，有些问题想请教一下：
1.细胞种的不均匀:
我是用10cm dish去养insulinoma cell line，我习惯先把medium 先加到dish ，再把
细胞一滴一滴分散加入medium後再8字个10圈（细胞在种之前都会pipeting个10次）。上
述都是已经问过周遭的朋友改善的方法，不过还是一样一边超满一边少到长不起来。不知
道哪里需要再改善?
2.之前在配medium时，没有注意到血清仍有悬浮物就直接加进medium，悬浮物会影响细胞
的生长吗?
3.解冻细胞时，1.直接把冻管的细胞液加进medium 2.离掉DMSO加新鲜medium。这两个方
法去种细胞对细胞生长那个会比较好?
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1F：推 roy047: 1.先确认培养箱是不是水平的QQ 2.应该没差 3.离掉DMSO 12/23 15:29
2F：推 joseph103331: 1. 不推荐8字，尤其dish是圆的容易有漩涡，比较推 12/23 15:40
3F：→ joseph103331: 荐10字，另培养箱水平的确有关，没有水平仪可以用 12/23 15:40
4F：→ joseph103331: 手机包在夹链袋里面用app去测。 12/23 15:40
5F：→ joseph103331: 2. 有疑虑就过滤，虽然经验上没有差异。 12/23 15:40
6F：→ joseph103331: 3. 一般细胞是先以培养基稀释，离心後去除DMSO，但 12/23 15:40
7F：→ joseph103331: 一些较脆弱的贴壁细胞会受到离心的影响，可以先用 12/23 15:40
8F：→ joseph103331: 培养基稀释後直接培养，细胞贴附後再小心置换培养 12/23 15:40
9F：→ joseph103331: 基。 12/23 15:40
10F：→ blence: 请问这株insulinoma是人类的吗？ 12/23 15:43
11F：推 greatime: 一般细胞DMSO 最後<0.5%不会影响生长 12/23 20:39
12F：推 tynse71864: 第三点两种都试过 偏好离掉 DMSO 12/25 00:00
13F：推 marvelous13: 1.也可能是dish的问题。2.不需过滤，离心即可 12/25 00:21
14F：推 Campanella: 我养在T75，先取所需的media加到flask，用media rinse 01/13 01:59
15F：→ Campanella: 一下flask，之後取出放入15ml tube，再取所需细胞加 01/13 01:59
16F：→ Campanella: 入15ml tube混均匀，再一起加入T75中。 01/13 01:59
17F：推 Campanella: 加细胞到flask时flask平放微微倾斜，加完之後静置hood 01/13 02:05
18F：→ Campanella: 一段时间，约5-10 分让细胞下沉plate down，移动到inc 01/13 02:05
19F：→ Campanella: ubator的时候细胞比较不会乱飘到别的位置 01/13 02:05