作者sunnyandsund (sunny)
看板Biotech
标题[求救] 关於western blot native gel 的问题
时间Tue Dec 26 17:23:27 2017
最近要跑native gel
因为以前都是跑denature gel
没有跑过这种的
想问板上有人知道native gel的配方吗?
我知道是没加SDS和sample 不用煮
那我想问在作法上还有什麽不一样吗?
因为我在网路上查就只是少了SDS
可是怎麽上胶和下胶的tris的PH值一样
难道native没分上下吗?
所以想请板上的好心人是否有配方?
以及配方的来源
感激不尽
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 122.117.114.207
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1514280210.A.DA1.html
1F：→ Ianthegood: native根据你想分的dimension也有很多种喔 最常见的大 12/26 20:15
2F：→ Ianthegood: 概是blue native page 12/26 20:15
3F：→ sunnyandsund: 你好 我是在网路上这个地方看到这样的配方,那这是P 12/26 21:03
4F：→ sunnyandsund: 他的配方就是跟SDS一样 只是少了SDS,但是她的上下胶 12/26 21:07
5F：→ sunnyandsund: 但是她的上下胶的tris的PH值都一样 想问这是为什麽 12/26 21:08
6F：→ sunnyandsund: 还有这样的话 这是属於你说的那种BN page吗? 12/26 21:09
8F：推 tynse71864: 点进去没有东西耶 12/27 09:01
9F：→ tynse71864: 另外 marker要重买 12/27 09:01
10F：→ sunnyandsund: 呃 因为留言的字数有限 我不知道要怎麽贴完整的网 12/27 10:12
11F：→ sunnyandsund: 那上下胶的PH值会不一样吗? 12/27 10:13
12F：→ a90648: native就同I大说的有很多种，不过我觉得你还是要弄清楚 12/28 10:38
13F：→ a90648: 为什麽SDS PAGE的上下胶PH不一样的原因是甚麽 12/28 10:39
15F：→ silverberry: 而且要做 western blot 的话，还要考虑到抗体能不能 12/28 16:14
16F：→ silverberry: 辨认"native"下的蛋白质。如同楼上大师们的分享， 12/28 16:14
17F：→ silverberry: 可能要先确定到底想要研究什麽问题。 12/28 16:15
18F：→ sunnyandsund: 谢谢楼上的各位 12/28 23:03
20F：推 t0953337796: 我之前做过 native page有分上下胶，但是Tris PH值 01/27 02:13
21F：→ t0953337796: 都是8.8 但是其他溶液的比例不一样。SDS PAGE上面是 01/27 02:13
22F：→ t0953337796: 用6.8是因为让glycine带正电，与tris带的电性不同， 01/27 02:13
23F：→ t0953337796: 所以可以挤压sample，让他从同一个起跑点出发，但是 01/27 02:13
24F：→ t0953337796: native page是为了保有蛋白原来的结构，不能受到挤 01/27 02:13
25F：→ t0953337796: 压，所以结论是有分上下胶，但是Tris皆为PH8.8 01/27 02:13