作者boulevard2 (boulevard)
看板Biotech
标题[求救] 请问HEK-293细胞做免疫萤光步骤
时间Thu Jan 25 03:44:39 2018
不好意思，对於这方面我还是新手，笨问题请大家鞭小力点
最近养了HEK-293细胞有HER2 express的，想要用已标上量子点的抗体做免疫萤光
第一次做实验是用活细胞做的，效果真的很不好，细胞常常飘上来
想问一下如果做fixation有没有甚麽要注意的，我看有人推荐用poly-lysine做coating
这是必要的吗?还是一般protocol就好?
另外因为HER2是表现在membrane上我需要再permeabilization吗?
谢谢大家的帮忙~~
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1F：→ williamyang: HEK293非常不贴,用coating会最好 01/25 04:41
2F：→ milkpa: 不用打洞，抗体选的好很容易观察，Qdot的话 01/25 08:17
3F：→ boulevard2: 谢谢帮忙，我会再试看看 01/25 16:51
4F：→ xxtomnyxx: 如果抗体辨认的序列是在 HER2 膜外的部分就不用打洞， 01/25 19:12
5F：→ xxtomnyxx: 如果是认细胞内的部分就还是要打洞 01/25 19:12
6F：→ boulevard2: 请问如果用cool methnol可以固定吗? 01/25 21:58
7F：推 joseph103331: HEK293使用polylysine是必需的,而且效果会好很多 01/26 13:18
8F：→ joseph103331: 一般还是建议先用paraformaldehyde固定,型态会较好 01/26 13:20
9F：→ joseph103331: 除非你做不出来,再考虑是不是用甲醇等试剂 01/26 13:20