作者kevinlee075 (逐梦彗星)
看板Biotech
标题[求救] flow cytometry分析细胞凋亡问题
时间Fri Feb 2 20:12:55 2018
小弟之前做别的细胞染Annexin V和PI上flow都很正常，但是最近用HepG2做实验，结果每次跑出来光是control就死了一堆，四象限中除了本来正常的那群细胞外都会多一坨在左上方，如下图
https://i.imgur.com/wqXqHQZ.png
由於自己操作的经验以及爬文有很多人都说到这个细胞很黏，因此我在上机前收集活细胞的阶段试过本来浓度的TE(小弟平时都用2倍，作用3分钟)也试过5倍TE作用1分钟来将细胞打下来，并且将处理时间控制在半小时内，但是结果并没有差异太大，请问各位对於flow操作以及养过HepG2的大大，我该怎麽办才能不会出现左上那坨死细胞?
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1F：→ greenmoon00: 我觉得这坨染pi的不是死细胞，应该只是没打散黏在一 02/07 11:49
2F：→ greenmoon00: 起,建议FS-SS那张图去框出单细胞的群,再把这群做fl1 02/07 11:49
3F：→ greenmoon00: fl3的分析 02/07 11:49
4F：推 greenmoon00: 如果会做cell cycle的flow,补个sub-G1更可以验证你 02/07 11:51
5F：→ greenmoon00: 凋亡的结果 02/07 11:51
6F：→ kevinlee075: 可是我是已经过筛了才上机的，这样也会有没打散的细 02/08 17:57
7F：→ kevinlee075: 胞吗？ 02/08 17:57
8F：推 ChesterYeah: 有做starvation吗 02/09 11:00
9F：推 ChesterYeah: 再来，你的cell cycle 图可以借看一下吗 02/09 11:01
10F：推 ChesterYeah: 你的annexin v颜色有选过？ 02/09 11:04
11F：推 ChesterYeah: 说错，以往看Pi记得是用FL2.. 02/09 11:06
12F：→ ChesterYeah: 图中只可以解释，你细胞品质可能有问题 02/09 11:07
13F：推 ChesterYeah: 可能你打细胞手法要更温和一点 02/09 11:09
14F：→ ChesterYeah: 细胞满度多少？ HepG2 记得长蛮快的 02/09 11:10
15F：→ ChesterYeah: 通常会用大盘养别太密集 以免抑制生长 02/09 11:12
16F：→ kevinlee075: 我没有做过cell cycle耶，所以可以试试看是吗？还有 02/09 17:10
17F：→ kevinlee075: 我用六公分种10^6个细胞做48 h看起来大概也只有七八 02/09 17:10
18F：→ kevinlee075: 分满而已 02/09 17:10
19F：→ kevinlee075: 用FL2或FL3会有差吗？我之前实验室学姐教我的时候就 02/09 17:11
20F：→ kevinlee075: 是都设定FL3，做其他细胞也很ok 02/09 17:11
21F：推 greenmoon00: 通常建议做fl3, fl2容易受AnexinV影响,但是cell cycl 02/15 00:10
22F：→ greenmoon00: e可以试fl2 02/15 00:10
23F：推 ChesterYeah: 要调萤光补偿 02/22 18:25
24F：推 ChesterYeah: 单独开一个PI channel 去看PI上去的程度 02/22 18:28
25F：→ ChesterYeah: FL几主要是看你萤光物波段 02/22 18:29
26F：→ ChesterYeah: annexin V也可以是别的色 02/22 18:30
27F：推 ChesterYeah: 你可能要测一下细胞周期喔，不然状态好坏会不太准 02/22 18:31