作者knight791211 (三途河的摆渡人)
看板Biotech
标题[求救] 原核表现蛋白诱导 溶解度
时间Mon Mar 26 17:14:10 2018
大家好 小弟之前参考了很多制造可溶蛋白的方法
比如用低浓度IPTG(0.1uM) 摇慢一点(50rpm) 低温隔夜 (16度)
结果用french press 处理後 跑SDS PAGE
上清液产物一样不多
破完菌的pellet 用8M urea 暴力解也溶不掉
只有在加2-Me跟buffer 煮沸才有办法让他溶解
电泳结果最多的就是那块无解pellet
请问这是我破菌不完全还是说他注定就不可溶?
(正在做的是fusion protein 性质很难捉摸)
大概是这样 感谢各位
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1F：→ Ianthegood: 显微镜看看你的汁有没有破乾净啊 然後你的protein跟fu 03/26 19:27
2F：→ Ianthegood: sion分别是什麽？ 03/26 19:27
3F：→ Ianthegood: 真的是0.1uM没打错齁 03/26 19:27
4F：推 joseph103331: Urea溶不掉是金刚护体吗XD 摇久一点呢? 03/26 20:13
5F：推 joseph103331: 另外, 改用GST fusion通常可以改善溶解度, 可以试试 03/26 20:15
6F：→ knight791211: 打错了 是mM 抱歉 03/27 12:43
7F：→ knight791211: 蛋白是cytokine fusion的东西教授说不可透露 03/27 12:43
8F：→ knight791211: 基本上我们实验室做的蛋白破完用urea溶个一小时都还 03/27 12:45
9F：→ knight791211: 是会有一堆渣渣在漂… 唯一的办法就是french press 03/27 12:45
10F：→ knight791211: 再打爆一次 囧 03/27 12:45
11F：推 joseph103331: 还有渣渣是正常的, 主要是Urea上清是否有蛋白质 03/27 17:03
12F：→ Ianthegood: 我induction有时候会用到0.05甚至0.01mM 可以把一些 03/27 17:06
13F：→ Ianthegood: 太好表现的水溶性小蛋白推回soluble 03/27 17:06
14F：推 vivitune: 考虑换表现菌株，例如star系列1-5，会表现chaperones ， 04/06 20:38
15F：→ vivitune: 帮助蛋白质溶解。 04/06 20:38
16F：推 vivitune: 有些蛋白质真的无法用细菌表现，可能要用到其他系统， 04/06 20:39
17F：→ vivitune: 比如昆虫细胞。 04/06 20:39