最近进行蛋白纯化遇到一些问题
先前买机台的时候有教育训练过，但年代久远也不太常使用，实验室其他人无相关使用经
验，迫切求助版上高手～～～
机型：AKTA avant
Column : HIC
1_sample application
手动injection後会设定高盐A相去洗loop
这时会有一些杂讯(导电度下降、高UV吸收)，原以为是solvent peak，但不含solvent的
样品也有此现象，会是空气跑进column吗？还是纯粹样品没binding上去?(但不懂导电度
为何会下降？)，而且收下来测浓度量也不多，有用硷洗机台和column，但此情形没改善Q
Q
2_Elution流速会影响纯化效果吗?
目前使用流速0.6mL/min实在流太久了，想问流速增加到1-1.2mL/min是否会使binding在c
olumn上的样品，更容易被洗下来，影响纯化效果？
3_回收率
使用手动针筒loading，针筒前端会残留，injection valve也会有一段残留
Column用低盐B相和水洗，UV值都在baseline上，所以应该没卡在column上
最怀疑的就是injection後A相洗loop的不明杂讯，可是收下来测UV量也没那麽多
想问还有哪些部分会影响回收率？
4_刚才发生的新问题QQ
样品injection後，高盐洗loop时杂讯跑出来，结果UV降不下去还一直飙高(导电度维持正
常值)，以为样品没binding上收样测浓度也很低，目前是先用高盐把UV洗到baseline，再
继续跑gradient做Elution，结果如何明天才知道，就是不知道为何UV会突然飙高啊啊啊(
崩溃)
麻烦大家了～～～谢谢～～QQ
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1F：→ Ianthegood: 个人没用过hic 不过经验是流速绝对影响 前面那个peak01/24 02:49
2F：→ Ianthegood: 大概是pressure peak 回收量低很有可能是你sample loa01/24 02:49
3F：→ Ianthegood: d太少 01/24 02:49
4F：推 july81212: 导电度应该是有残留低盐度的buffer在loop loop本身要201/24 07:59
5F：→ july81212: -3倍体积才能完全填充 不过残留量小不太会影响binding01/24 07:59
6F：→ july81212:01/24 07:59
7F：推 july81212: 另外调流速前要先看你要的peak分辨度如何 一般会先从g01/24 08:02
8F：→ july81212: radient 调完再调整流速部分01/24 08:02
9F：推 july81212: 杂讯我想先不管量的问题 洗出时间在injection後 有小 01/24 08:12
10F：→ july81212: 於2CV 也有可能是unbinding protein 建议跑个胶check01/24 08:12
11F：→ july81212: 一下 如果没有你的target 那就不用太担心01/24 08:12
12F：→ wizchoco: 感谢大大们回答～～loop在使用前都有先用大於5CV的水和01/24 12:24
13F：→ wizchoco: 大於5CV的高盐去洗了01/24 12:24
14F：→ wizchoco: 回收率部分，有用低盐和水去洗，都没洗出什麽，但用0.1N01/24 12:26
15F：→ wizchoco: NaOH去洗，就有高UV吸收被洗出来 01/24 12:26
16F：→ wizchoco: 看来是卡在column上QQ01/24 12:27
17F：→ Ianthegood: 只能用hic? 要不试试iex?01/24 22:16
18F：→ wizchoco: 目前没办法换IEX QQ01/24 23:26
※ 编辑: wizchoco (123.195.190.114), 01/24/2019 23:42:03
※ 编辑: wizchoco (123.195.190.114), 01/24/2019 23:46:29
19F：推 rasaze: 高盐有时会造成小盐块析出卡在detection cell用大量水溶 01/26 13:25
20F：→ rasaze: 解洗掉就好，之前做高盐样本有遇过，给您参考 01/26 13:25
21F：推 rickson: 恩 02/02 19:02
22F：推 windcloud27: 我这边的业务是教说每次跑完高盐的buffer後都要用热 02/08 23:22
23F：→ windcloud27: 水冲一遍机器 02/08 23:22