这次由我展昭负责收。 请大家在礼拜四中午12:00前给我。 实验3 临床上有许多由细菌引起的疾病，在采取治疗步骤之前，必须先找出致病菌， 才能对症下药。所以菌种的分离与纯种培养(isolation and pure culture) 是临床微生物学实验中最基本也是最重要的技术之一。近年来，细菌遗传学及 分子生物学的研究发展中，由於细菌之基因简单易控制，且繁殖速率快，已成为 不可或缺的材料之一。因此，如何针对不同实验目的，选择培养基的形态及成分， 并正确的接种，才能成功的分离、培养及监定细菌，即是本实验的目的。 一、目的 1.让同学了解如何针对实验的需要，选用不同形态的培养基。 2.练习不同接种方式。 二、实验材料 1.一般所指不同形态的营养培养基，其主要成份完全相同（如前章所述），分类 上乃依其所含洋菜胶之百分比，分为固态培养基（solid medium，约含1.5%洋菜 胶）、半固态培养基（semi-solid medium，约含0.65%~1%洋菜胶）及液态培养 基（liquid medium，又称broth，不含洋菜胶）。 2.固态培养机可再依需要而分装在塑胶培养皿（petri dish）称之为平盘培养皿 （plate），或试管中，形成一斜面，称之为斜面培养皿（slant）。 (1) 平盘培养机适用於菌种分离（isolation）、纯种培养（pure culture）、 计算菌落数目（colony count）及水质检测时的倾倒平盘法（pour plate） 等项目。菌种分离时的接种方式称为四区划分法（streaking method）。以 接种环（loop）取菌，先在培养基其中约四分之一部分作Ｚ字型连续划线 後，将接种环烧红，待冷却後，再由第I区划出到第II区，重覆相同的步骤， 完成第III区与第IV区的接种，个区间隔约90度角。 (2) 固态培养基置於试管中常制备成斜面，以增加接菌面积，适用於菌种保存、 运送及生化试验。以接种环取菌後，在斜面上做蛇形划线。另外，也可以接 种针取菌後，在斜面上做蛇形划线，同时进行穿刺。 3.半固态培养机适用於菌种只生化特性检验。例如：观察细菌发酵糖类的情形、是 否产生气体及运动特性等现象。接种方式称为穿刺法（stabbing method），已接 种针（needle)为工具，使用原则与接种环相同，即须先经过加热灭菌，冷却後再 取菌，直接插入培养积约三分之二深，再依原路径抽出接种针。 4.液态培养基适用於了解细菌生长曲线图及大量培养细菌时。接种方法可用接种环 或接种针取菌後，直接伸入培养基中，轻轻搅拌（stirring）即可。 5.菌种：金黄色葡萄球菌，标记为"S"。大肠杆菌，标记为"E"。 三、实验内容 1.每组分得： (1)一片平盘固态培养基 (2)两管斜面固态培养基 (3)两管半固态培养基 (4)两管液态培养基 2.依上述之接种方式进行接种，再放入37度Ｃ的培养箱，隔夜培养。 四、注意事项 1.做平盘固态培养基接种时，盖子半开，或靠近酒精灯周围，以免空气落菌影响结果。 2.做试管内接种时，接种环或接种针不可碰到管口，以免杂菌污染。 3.计算菌落数目时，一个平盘中以目视30~300个菌落为适当的浓度，若数目过多，应 加以稀释再做。 4.观察液态培养基结果之前，需摇晃试管後，再判读，以免因菌体沉在试管底部而误判。 5.以半固态培养基培养後，若发现细菌生长如刷子状，须以显微镜观察或做鞭毛染色後， 才能确定其运动性的存在。 五、结果记录 1.描述细菌在不同培养基的生长情形。 2.比较金黄色葡萄球菌与大肠杆菌的生长情形。 3.描绘菌落出现的情形及形态 六、问题与讨论 1.如果以液态培养基培养，得到细菌生长情形与时间只关系图如下，请就1、2、3、4部分 解释之。 2.影响细菌生长的环境因素有哪些？ -- 好的旅行家，如你，是亦行亦止的， 因为只有『行』，才能去到远方， 只有『止』，才能凝神倾听，才能涣然了解，才能勃然动容， 然後，才有琐细入微的记忆和娓娓道来的缕述。 --张晓风 送你一个字-- --

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