缴交的时间是12/30星期五下午1点前 星期四78节可交到系统生物学教室 星期五12:00~13:00我应该会在1A01教室收大家的报告 谢谢各位<(__)> by淑娴 实验十 化脓性球菌(Pyogenic Coccus) 一、 目的 监别Staphylococcus, Streptococcus, Pneumococcus (Streptococcus pneumoniae) 等化脓性球菌。 二、 实验材料 1. 菌种 (1) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Sra (2) 白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)Ac (3) 柠檬色葡萄球菌(Staphylococcus citrus)Ci (4) α溶血性链球菌(α-hemolytic Streptococci) (5) β溶血性链球菌(β-hemolytic Streptococci) 2. 一片营养培养基平盘 3. 3%过氧化氢(H2O2)溶液 4. 载玻片一片 5. 木蜜醇固体培养基(mannitol solid agar) 6. 羊血浆 7. 无菌培养皿 8. 血液培养基平盘(blood agar plate) 9. 镊子、接种环、接种针 三、 实验步骤 1. 触酶实验(Catalase test) (1) 於载玻片上以签字笔划分成二区，并标明A、B。 (2) 以接种环行无菌操作，各挑取适量的Staphylococcus菌属、Streptococcus菌属二菌种 ，涂抹於载玻片上的A、B二区。 (3) 二区各滴1~2滴的3%过氧化氢溶液。 (4) 静置数分钟後观察结果，不同菌属是否有差异的结果。 2. 木蜜醇发酵实验(Mannitol fermentation test)：将沾有三种不同Staphylococcus的 接种针，分别种入含有溴甲酚紫(bromocresol purple)指示剂和mannitol的平盘培养 基中，置於37℃培养，经24小时後观察。 3. 色素形成试验(Pigment formation test)：将三种不同Staphylococcus接种於营养培 养基平盘上，於37℃培养48~72小时後观察之。 4. 链球菌的溶血作用(Hemolytic reaction)：将Streptococcus接种於血液培养基平盘， 至於37℃培养箱中，隔天观察之。 四、 原理 (一) Staphylococcus的监别 Staphylococcus的种类众多，其中有些具致病性，例如Staphylococcus aureus， 有些则较不具致病性，例如：Staphylococcus albus及Staphylococcus citrus。 Staphylococcus albus属於表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)，其致病性 小，但量多时亦会致病。 这些不同种类的Staphylococcus可以利用下列几种试验检测其特性： 1. Catalase test：主要用来监别Staphylococcus和Streptococcus (Staphylococcus 含有catalase)。 (1) 原理：具有catalase的细菌会催化H2O2'O2+H2O反应进行，且反应为''立即''反应。 (2) 方法：用接种环挑取菌种，至於玻片的H2O2中。若用slant培养菌，可直接滴H2O2於 slant上。 (3) 结果：A产生气泡O2为阳性，故可推测A中加入的细菌为Staphylococcus，B没有产生 气泡O2。 (4) 注意：Streptococcus需要血才会长得好，一般培养在blood agar (5% sheep blood) 中，需轻刮其上的细菌，勿刮到blood agar，否则会因血球也具catalase而 产生伪阳性的反应结果。 2. Mannitol fermentation test：可区分出3种Staphylococcus，因为其致病力差很多。 (1) 原理：Staphylococcus aureus会分解mannitol，而使指示剂例如bromocresol purple 由中性的紫色变成酸性的黄色，或phenol red由红色变成黄色。 (2) 方法：将沾有三种Staphylococcus的3支接种环，分别涂抹於含有phenol red和 mannitol的培养基三区域中，经37℃培养24小时後观察。 (3) 结果：只有含有Staphylococcus aureus的区域周围变成黄色，另两菌的颜色没有变化。 3. Pigment formation test：色素是最早用来区分细菌的方法，所以细菌的学名中才 有aureus, albus, citrus等字，但由於有些细菌会变种，所以现在多用其他方法区分。 (1) 原理：因为色素为脂溶性物质，不会溶於培养基中，所以会出现在细菌本身的菌落中。 (2) 方法：在培养皿上划分成3个区域，再接种细菌(aureus, albus, citrus)即可。 (3) 结果：於25℃培养48~72小时後，可见到Staphylococcus aureus呈金黄色， Staphylococcus albus呈白色，Staphylococcus citrus呈柠檬黄色。 (二) Streptococcus的监别 Streptococcus的形态特徵为短链球状或长链球状，根据在blood agar上的溶血作用， 又被分为alpha、beta、gamma等溶血特性。 4. Hemolytic reaction：可用来区分alpha, beta, gamma-hemolysis三种 Streptococcus的细菌。 (1) Alpha(α)：不完全(incomplete)溶血，菌落周围为一圈草绿色。 (2) Beta(β)：完全(complete)溶血，菌落周围可见一圈透明的溶血圈。 (3) Gamma(γ)：完全不溶血(nonhemolytic)，菌落周围没有改变。 5. Bacitracin sensitivity test：用来区分出β-group A Streptococcus。 (1) 原理：利用β-group A Streptococcus会对bacitracin(枯草杆菌素)有感受性， 而区分出来。 (2) 方法：将枯草杆菌素贴在涂满细菌的培养皿中。 (3) 结果：枯草杆菌素周围出现了抑制圈，故可知此菌β-group A Streptococcus。 结果纪录 1.请将三种葡萄球菌的分析结果说明并比较。 2.请将三种链球菌的分析结果说明并比较。 问题讨论 1.利用镜检以菌落观察法是否可区分出葡萄球菌与链球菌?如果不行，应该再做何种试验? 2.简述链球菌的溶血情形及其特徵。 3.血液培养基平盘该如何制备?在何种情况下须使用之?目的为何? 4.实验室欲监定出肺炎链球菌，常使用何种试验? 实验十一 肠内杆菌科(Enterobacteriaceae) 肠内杆菌科(Enterobacteriaceae)的细菌是人类或动物肠道内主要的菌丛，皆为革兰 氏阴性菌，包括大肠杆菌(Escherichia coli)、产气杆菌属(Enterobacter spp.)、变形 杆菌属(Proteus spp.)、沙门氏杆菌属(Salmonella spp.)、志贺氏菌属(Shigella spp.) 等细菌。肠内菌分离最大的特性是同时采用多种培养基，利用不同菌种之间生化特性的差 异，作逐步分离、筛选和监定。 一、目的与原理 将检体接种在含有特殊成分的培养基上，如EMB、SS等，观察不同肠内杆菌在不同培 养基的生长情形，可做为初步分离的根据。将初步分离的菌落接种在特定设计的各种生 化培养基内(如IMViC试验)，可依其表现的不同生化特性监定菌群和菌种。 二、实验材料 (一) 细菌的培养与检品 培养24小时的大肠杆菌(Escherichia coli, E)、产气杆菌(Enterobacter aerogenes, EA)、变形杆菌(Proteus vulgaris, PV)、沙门氏杆菌(Salmonella paratyphi B, Sal)、 志贺氏菌(Shigella dysenteria, Shi)培养基。 1. Eosin-methylene blue (EMB)平盘1个 2. Urea agar平盘2个 3. Nutrient agar平盘1个 4. Triple-sugar iron (TSI)半斜面培养基4支 (二) 仪器 酒精灯、接种环(loop)、接种针(needle)、滴管。 三、实验步骤 一般常用含有生化特性的监定培养基及方法如下： 1. 含有碳水化合物(carbohydrate)培养基：可监定菌种是否会分解发酵碳水化合物如葡 萄糖、乳糖等，若会发酵则会产生酸或气体，此时培养基内的指示剂酸硷度改变可使菌 落的颜色改变，作为监定的依据。Eosin-methylene blue(EBM)培养基的指示剂为eosin Y和methylene blue，其酸性时为紫黑色，pH 4.5以下会形成中心黑色、有绿色金属光 泽的大菌落。 2. Triple-Sugar Iron (TSI)培养基：最常做为监定肠内杆菌多样性变化的培养基。主 要是依据细菌发酵醣类的结果、是否产气和产生硫化氢等三者情形作为比对的参考。 (1) K/K整支颜色不变(维持红色) (2) A/AG(+)整支颜色变黄色，并有气体产生。 (3) A/AG(-)整支颜色变黄色，没有气体产生。 (4) K/AG(+)H2S(+)试管下端变黄色，但斜面三角顶端为红色，并有气体产生。若有 黑色沉淀物产生，为FeS产物。 3. 尿素水解作用试验 (1)材料 A.接种环、酒精灯。 B. Medium：尿素培养基(urea agar) C.菌种：Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris, Salmonella paratyphi B, Shigella dysenteria。 (2)步骤 A.将不同菌种接种於尿素培养基 B.置於37℃、培养2~16小时。 C.观察结果 (3)结果：记录培养基之颜色变化，呈现粉红色表示阳性反应。 结果纪录 1.请照相或绘图说明各菌种 TSI agar呈现的结果。 2.请说明测试菌种在IMViC agar的结果。 问题讨论 1.请尝试说明目前在医学中心如何检验肠内杆菌科的细菌? 2.请举出肠内杆菌科属於法定传染病的病原体有哪些? --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 125.233.151.55 ※ 编辑: shwang 来自: 125.233.151.55 (12/28 21:53) ※ 编辑: shwang 来自: 125.233.151.55 (12/28 23:48) ※ 编辑: shwang 来自: 125.233.151.55 (12/28 23:50) 我记得老师上课是说： I M V C E coli + + - - Ea - - + + 不过我们没做这四个实验 我不知道要不要写~~ ※ 编辑: shwang 来自: 125.233.145.185 (12/29 21:11) ※ 编辑: shwang 来自: 125.233.145.185 (12/29 22:15)