作者shiaobau (木人)
看板Chemistry
标题Re: [实验] HPLC 中 mobile phase 的互相影响之问题
时间Mon May 30 14:00:24 2011
※ 引述《HPLC (高效能液相层析仪)》之铭言：
: 各位大大好
: 从我们学长姐就教导我们
: HPLC 中 A相 (ACN) 以及 B相 (MeOH)是不能混再一起的
: 会产生大量的气泡
基本上 不同的溶剂要互溶时 都会产生气泡
所以移动相配置完成後 就要超音波震荡degas
但如果是有双pump或有电磁阀系统的层析仪
通常都有搭配degaser (除气装置)
这时两个以上的相就可以分别抽入 在degaser中混合
除气装置的原理是用特殊的透气膜管
让两相以上的溶剂於膜管中混合
膜管置於真空内 可以把产生的气泡逼出
但如果管线原本就有大气泡 是不能逼出的
所以最好要上线的移动相 都用超音波degas一下
包括纯的层析专用溶剂
因溶剂存放时 难免会溶入空气
: 还有 A相 (ACN) 以及 D相 (Buffer) 也是不能在一起的
: 会产生结晶
缓冲液使用到盐类
如果跟ACN混合 有可能因溶解度下降而使盐类析出
基本上会溶出可能是buffer调整得不好
或者是ACN变动太大 (有的跑梯度 最後会用到100% ACN)
不过 这两个基本上很常混在一起分析
没有不能一起做 只是实验时间不要太长
移动相的有机相不要太高
做完实验马上洗
(怕析出可以用梯度内最高比例有机相
加入buffer 冷藏静置看看有没有析出物)
: 我比较好奇的是...这是真的吗= =?
: 有没有其他实验室也听过这样的传言??
这.....不是传言.....
本来做LC 移动相的部分就要注意气泡与盐类析出
只是你们学长姐似乎讲得太可怕了....
MeOH与ACN不少分析方法都会混用
ACN加buffer更是蛮常用到的... (google key进去 就有很多了)
有空的话 可以看看仪器相关的论坛
有不少不错的知识
: 因为现在我们有一台HPLC以前是跑盐类的
专门一台跑盐类是不错
但不代表那一台就不用洗
如果盐类析出太多
很有可能刮伤pump内部的宝石柱塞杆及宝石球
: 现在没再跑 小弟要用这台HPLC进行分离Q_Q
: 可是一直洗不乾净
: 没装上Column 80:20 (MeOH:H2O) 流速0.2 mL/min 压力就来到 20
若是一般的LC
0.2 mL/min的背压有20
拉到1 mL/min可能就100多了
如果你们用的机型是日本的那两间 最大压力设250那种
那应该不只一个垫片挂了
建议分段拆卸 看到底是哪几颗垫片有问题
然後用水洗一段时间 (不要上管柱)
再看有没有把背压洗下来
不然就要换垫片了
: 可是一装上Column 压力就会慢慢上升 我看过最夸张到 60 (我不知道单位耶= =")
: 有学长叫我用ACN 可是我又怕上面说的会产生结晶 所以才上来问问
用ACN干嘛??
洗管柱吗??
如果是的话 0.2 mL/min 一般的4.6 x 150 mm的管柱 这支也有问题了...
一些想法分享 有错再请版友指正
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.33.236.174
※ 编辑: shiaobau 来自: 114.33.236.174 (05/30 14:10)
1F：推 HPLC:我们是用 HITACHI 的 我们有把可以拆的 都拆下来震 怕是盐类 05/30 14:58
2F：→ HPLC:堵塞 刚刚看了一下 100%纯水 流速0.2 压力是 11 05/30 14:59
震完以後 不装管柱
从最後端的垫片依序松开
看背压多少
不过 100%的纯水 本来背压就会高一点
看你们机子原本保存在什麽样的溶剂里
还有 纯水很容易长菌 用完最好所有管子里都换成有溶剂的移动相
就算要放纯水 也要加个10%左右的MeOH或ACN
3F：→ HPLC:我还没用ACN洗过 因为怕有结晶产生 所以一直都没用 05/30 15:00
4F：→ HPLC:那个 压力60 是 MeOH:H2O (80:20) 流速0.2 05/30 15:01
5F：→ HPLC:所以现在大大是叫我用100%纯水冲冲看噜? 05/30 15:02
不装管子 用100%的纯水慢慢洗
洗个半天看背压有没有掉
没有掉大概垫片已经挂了
再来看是哪个垫片有问题
最容易塞的大概是最靠近purge那个垫片
6F：→ HPLC:压力最大...我看到他预设是420= =" 不过这样Column早爆了吧 05/30 15:05
420是最大的压力
单位应该是kgf
日本这两间都用这个单位
※ 编辑: shiaobau 来自: 114.33.236.174 (05/30 16:09)
7F：推 HPLC:我们最常用的是80:20(MeOH:H2O) 我们Column保存液也是这个 05/30 17:42
8F：→ sisay:宝石球一颗2000 超贵~ 05/30 23:04
9F：推 innevertears:超音波震荡大约5分钟就好 05/31 10:05
最好还是看溶剂混合的状况
我个人是看震荡时产生的气泡
如果还是大颗 而且很多 那就继续震
如果已经是小小的气泡 靠液面处的话 就可以拿起来了
10F：推 HPLC:我刚刚测试 80:20(MeOH:H2O) 流速1 mL/min 压力 136 =_=" 05/31 17:14
11F：→ HPLC:是Column的问题吗= =? 05/31 17:14
其他的条件呢? 那种管柱 温度等等
不过如果要知道是不是管柱的问题 换另一台LC试就知道了
※ 编辑: shiaobau 来自: 175.180.224.161 (05/31 20:52)
12F：推 HPLC:我们Column 放在室温 C18 关东的 46*250(mm) 5um 这样 05/31 23:43
13F：推 HPLC:而且我发现 利用保存液 压力会慢慢的上升耶= =" 06/01 18:19
14F：推 iori23041114:136离最大值还很远阿(误 06/02 10:22
15F：→ iori23041114:要洗系统里面的盐类，就像原po说的，纯水加个10%有机 06/02 10:22
16F：→ iori23041114:溶剂去洗，洗个一天看情况如何，先开purge洗，洗前段 06/02 10:24
17F：→ iori23041114:就是让他直接进入废液桶，然後关purge洗，假设压力增 06/02 10:25
18F：→ iori23041114:加，表是前段系统依旧很脏，可能要请工程师来看(其实 06/02 10:26
19F：→ iori23041114:直接找工程师最快)purge那颗很像叫做前置滤心一颗200 06/02 10:27
20F：→ iori23041114:到300，到此为止都在讨论系统，没牵扯到管柱，洗管柱 06/02 10:31
21F：→ iori23041114:先高水相洗盐，之後高有机洗比较易卡的化合物 06/02 10:33
22F：→ iori23041114:拍谢我对这压力不熟，都用bar跟psi 06/02 10:35