作者chnctu5566 (回家吧)
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标题［请益］uv-vis定量问题
时间Tue Jun 21 13:58:03 2016
各位好
本小鲁做实验时，需用特定波长的uv吸收度来定量其中所含的金属离子的量。
一直以来都是以积分面积来算其浓度为何。（指导教授不清楚uv的理论）
但近日来，被一位中部国立中字辈的学长告知我的定量方法是错的！
此学长，说吸收度即为浓度！而且他大学的仪器分析也是这样教！
若按照学长的说法，我的实验将会出错
故来此请教uv-vis 定量的问题。
谢谢
手机发文！若有排板不好！敬请谅解！
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1F：→ Navarro: 不如把你定量的方法说来听听? 06/21 14:09
2F：→ chnctu5566: 先配置1M的硫酸当reference ,先测量1000ppm的标准品。 06/21 14:32
3F：→ chnctu5566: 此标准品会在312nm有一个峰值出现，积分此峰面积并订 06/21 14:32
4F：→ chnctu5566: 此总面积为1000ppm.再将此标准品稀释成500ppm,250ppm 06/21 14:32
5F：→ chnctu5566: 与125ppm，再积分其面积。其总面积为1000ppm的0.493， 06/21 14:32
6F：→ chnctu5566: 0.248与0.123。再测试样品，将样品312nm位置的总面积 06/21 14:32
7F：→ chnctu5566: 与1000ppm的面积去对比，进而得到其浓度！ 06/21 14:32
8F：推 YJM1106: 你当你指导教授是学店出来的？ 随便都是phD怎麽可能不懂u 06/21 15:15
9F：→ YJM1106: v 06/21 15:15
10F：→ chnctu5566: Y大！谢谢你的指教！我老师是做理论的，但想要将理论 06/21 15:35
11F：→ chnctu5566: 计算和实际所做的对比！而原本我所使用的方式老师觉得 06/21 15:35
12F：→ chnctu5566: 没有问题。但学长来一起讨论後，提出用吸收值即可直 06/21 15:35
13F：→ chnctu5566: 接做为浓度的指标。但是我将浓度吸释到200ppm以後， 06/21 15:35
14F：→ chnctu5566: 其吸引质却比300ppm的高（积分面积是符合的）！但却被 06/21 15:35
15F：→ chnctu5566: 质疑我浓度配错（我配了10组做比较，互有高低）！因 06/21 15:35
16F：→ chnctu5566: 为有所疑惑才上来问问版上能否解答！ 06/21 15:35
17F：→ tpo3: 检量线：测量不同浓度与blank在特定波长下的吸收，然後找出 06/21 16:45
18F：→ tpo3: 讯号与浓度的关系，此时即可知道侦测极限与线性关系为何 06/21 16:47
19F：→ tpo3: 然後可以检测自己配量的浓度，来测试检量线的准确度 06/21 16:48
20F：→ tpo3: uv吸收关键字：beer's law，浓度够低时才适用 06/21 16:50
21F：→ tpo3: 当然，待测样品浓度应落在检量线内 06/21 16:52
22F：推 YJM1106: 你的待测物一定跟溶剂有很强的交互作用，才会分裂成一个 06/21 16:56
23F：→ YJM1106: 能带，变成吸收峰的状况 06/21 16:56
24F：→ YJM1106: 不然一般都是取最大吸收波长就好了 06/21 16:59
25F：→ YJM1106: 两种算法R平方是多少呢？ 我觉得选高的那个做XD 06/21 17:01
26F：→ chnctu5566: 谢谢T大！但我的样品20ppm以下时，peak就完全侦测不 06/21 17:07
27F：→ chnctu5566: 到了！ 06/21 17:07
28F：→ tpo3: 意思就是你的侦测极限或者误差在 20 ppm 以上 06/21 17:14
29F：→ chnctu5566: 谢谢Y大！积分面积30ppm~500ppm R 平方是0.91！吸收 06/21 17:18
30F：→ chnctu5566: 度100ppm~500ppm R 平方是0.81(若是30ppm~500ppm是0.6 06/21 17:18
31F：→ chnctu5566: 2） 06/21 17:18
32F：→ tpo3: 在我个人的认知中，要做准确的定量的话，检量线要三个九以上 06/21 17:28
33F：→ tpo3: 也就是R2=0.999以上 06/21 17:29
34F：→ tpo3: 从你参考 06/21 17:29
35F：→ tpo3: 抱歉，供你参考 06/21 17:30
36F：→ chnctu5566: t大谢谢！我自已做icp时检量线确实做到0.9999！用uv 06/21 17:42
37F：→ chnctu5566: 做检量线时，连0.99都做不到！而我只是要找出最佳的 06/21 17:42
38F：→ chnctu5566: 监定方法！将其浓度带入理论方程式中 06/21 17:42
39F：→ tpo3: 最後1点，若是用UV定量，吸收度须在1以内才会准确 06/21 17:47
40F：→ jerry9437: 嗯? 所以你的待测物不能用A=εbc算吗? 有差异? 06/21 17:48
41F：→ BEERboy: 去读一下beer's law对任何光谱学都有帮助 06/21 18:02
42F：→ BEERboy: 但也须留意一下你的溶解背景吸收 06/21 18:03
43F：→ BEERboy: 判断了溶剂吸收情形才知道该用什麽光谱侦测 06/21 18:08
44F：→ YJM1106: 交互作用吧～电子能阶变成电子能带了XD 06/21 18:36
45F：→ tony15899: uv-vis不是用分光光度计? 怎麽还会有积分面积 06/21 19:21
46F：→ chnctu5566: Jerry大！算过了，有误差！ 06/21 19:39
47F：→ chnctu5566: Tony大！我不懂你的意思！ 我的图谱类似这样 http://i 06/21 19:48
48F：→ chnctu5566: .imgur.com/xKQ0C3U.jpg 。 06/21 19:48
50F：→ tony15899: 这是扫吸收光谱的图吧 uv-vis通常用吸收最高处波长 06/21 20:08
51F：→ tony15899: 去测 以你那张图看大概630nm左右的地方 06/21 20:09
52F：→ faniour: 分光光度计跟UV-Vis是不同的东西 06/21 22:02
53F：→ faniour: Beer's law 定量要0.3以下，成分单一 06/21 22:08
54F：→ faniour: 会随浓度产生平衡物种的不适用 06/21 22:08
55F：→ faniour: UV-Vis可以做的很准，都可以是HPLC的侦测法之一了 06/21 22:09
56F：→ faniour: 0.91对定量来说，没什麽意义 06/21 22:10
57F：→ chnctu5566: 谢谢各位的答覆！我还是采用学长说的直接用吸收度好了 06/23 18:13
58F：→ chnctu5566: ！虽然R平方只有0.6，但至少不会一直被刁这个问题！ 06/23 18:13
59F：→ faniour: ....... 06/23 18:38
60F：→ chnctu5566: 一直被这问题钉在台上，我也很无奈！还是妥协好了！ 06/23 18:47
61F：→ chnctu5566: 不然在我的系统中，个人还是比较相信积分面积！ 06/23 18:48
62F：→ faniour: 2个都不是很正确 06/23 23:36
63F：→ faniour: 去看一下Beer's law有这麽困难吗？ 06/23 23:37
64F：→ faniour: 积分面积不是全然没理，如果你真的清楚自己在做什麽 06/23 23:38
65F：→ faniour: 以UV 定量金属离子是传统分析了 06/23 23:40
66F：→ faniour: 有没有物种干扰，浓度范围是否正确，取析收小於0.3 06/23 23:42
67F：→ faniour: 是希望穿透要大於0.5 06/23 23:51
68F：→ faniour: 避免分析物自己的作用，有些成份穿透到0.9都会做用 06/23 23:52
69F：→ faniour: 不管是什麽，用线性区去定量是基本的 06/23 23:53
70F：→ faniour: R到0.61，线性都不线性了还套什麽式子 06/23 23:53
71F：→ faniour: 前面有人提到能阶变能带，这是也许可以积分的原因 06/23 23:55
72F：→ faniour: 就巨观来说能带的分布受物种跟环境控制，积起来是1 06/23 23:57
73F：→ faniour: 但是你也只拿到R=0.91 06/23 23:58
74F：→ faniour: 配已知液试看看标准添加法吧 06/23 23:59
75F：→ chnctu5566: F大！谢谢你的回应！我的样品所测出的皆是以能量带的 06/24 02:37
76F：→ chnctu5566: 方式所展现！我的样品放置於空气中或进行稀释时，皆 06/24 02:37
77F：→ chnctu5566: 有还原现象产生。当还原现象产生时，在254nm的位置会 06/24 02:37
78F：→ chnctu5566: 有多ㄧ只peak! 我举个例子！若我一开始配置的是200ppm 06/24 02:37
79F：→ chnctu5566: 的溶液，在324nm的位置其吸收度与积分面积分别为1与10 06/24 02:37
80F：→ chnctu5566: 0！当我放置1天後或将其稀释为1/5时！在254nm会多生 06/24 02:37
81F：→ chnctu5566: 成一只peak!此时324与254的吸收度分别为0.55与0.15！ 06/24 02:37
82F：→ chnctu5566: 而积分面积分别为72.8与27.1！ 06/24 02:37
83F：→ chnctu5566: 故以我所做的实验来看！吸收度并不合适做为依据 06/24 02:38
84F：→ chnctu5566: 此外关於r平方！若是用254与324的总面积来看！r平方=0 06/24 02:42
85F：→ chnctu5566: .998 06/24 02:42
86F：→ faniour: 还是建议你花点时间看一下beer's law, 中文资料不少 06/24 09:29
87F：→ faniour: 还有浓度定量的手法 06/24 09:30
88F：→ faniour: 看你的描述真的觉得问题不少，或是请教化学系分析组 06/24 09:32
89F：→ faniour: 的人，自己的研究还是谨慎点 06/24 09:33
90F：→ faniour: 投稿期刊这种手法容易被攻击而忽略研究本身的意义 06/24 09:35
91F：→ faniour: 样品常常是现配现用，坏掉是你的责任 06/24 09:37
92F：→ faniour: 稀释会变表示样品有交互作用 06/24 09:37
93F：→ faniour: 溶液中常是能带，吸收还是能用，能带只是用积分的 06/24 09:40
94F：→ faniour: 一点理由不是这样就此解套 06/24 09:40
95F：→ faniour: 以上，FYR 06/24 10:02
96F：→ jerry9437: 嗯 如果你提出在空气中会坏的问题 就容易被质疑东西不 06/24 14:11
97F：→ jerry9437: 同 已经不是原先的物质 即使能用面积算 也会被讲不同 06/24 14:12
98F：→ jerry9437: 因为对你来说那是事实 但会多根peak就代表两者之间有差 06/24 14:12
99F：→ jerry9437: 不能视为同样的待测物 06/24 14:12
100F：推 teardropbox: 直接标准品做检量对照浓度就好 uv-vis浓度低误差大 07/02 22:45
101F：→ teardropbox: 金属为何不用烧的？AA or ICP 07/02 22:45
102F：→ faniour: 不是做仪分的会有这两设备吗？做仪分会问这个问题吗？ 07/03 10:29
103F：→ faniour: UV能测多低要看待测物的吸收系数大到什麽程度 07/03 10:32
104F：→ faniour: 金属离子有几百几千的，也有到几万的，常配到mM 07/03 10:33