※ 引述《tony15899 (急速せんこ~)》之铭言： : ※ 引述《scy2468 (scy)》之铭言： : : 目前发现问题: : : 分析物(较亲水的)滞留时间会改变，提前流出，而且时而正常时而不正常。 : : 正常时分析物的感度讯号良好与以往同 : 你的问题看起来是没有设定层析梯度的平衡时间， : 假设方法是从20%甲醇逐渐升到100%甲醇後结束， : 当没有设定平衡时间时，即便到下一针前pump会回到20%甲醇状态， : 但这时间太短所以并不足以把管柱内流洗夜全部置换成20%甲醇， : (所以管柱内溶液甲醇比例会高於20%) : 当你下一次进样後因为管柱内甲醇比例较高，波锋会观察到滞留时间往前移 : 解决方法是设定一段平衡时间，举例： : 时间(mins) 甲醇比例 : 0 20% : 10 100% : 15 100% : 16 20% : 25 20% : 16~25分钟就是平衡管柱时间，这段时间要多久不一定 : 你可以尝试设定5或10分钟(可能更久)，只要滞留时间不再飘移就可以 : 很多文献方法不会显示平衡的时间，这点要特别注意 首先就跟Tony哥说的依样，因为你跑的是梯度，所以在设计流速时 最後要让他回到你的初始梯度然後让它平衡。 这时平衡的时间自己抓，不见得多久，通常是第一次在连续打， 就可以抓要平衡多久才够。 然後这只是为了让你每次出来的差异性不要那麽大而已， 至於你说的死柱还有14天後有差异的问题， 以我自己的经验来说，或者说被老师骂的经验来说， 只平衡一个小时太短了......... 建议前一天下午先安装好正常速度流洗2小时，我当初是用1ml/min2小时， 然後调成低流速让他OVER NIGHT，侦测器不要开喔，只是在平衡管柱....... 然後~~~~为了保险，拜托每次移动相，如果可以最好都配新的， 用固定瓶子洗乾净>震荡>DD>溶液>震荡>装配好的溶液>除气 然後装上去後照步骤慢慢洗，不要马上装管柱最後才洗管柱 然後电磁阀最好在刚开始时，假如你家最多可以四溶液， 最刚开始洗PUMP和混和时，筏打开，四个电磁阀都让他动 因为经验是，如果你只用两个，其实另外两个洞不够紧， 偶尔的小气泡还是有机会影响结果。 上面是前面 接下来说测完後，清洗部分一样一个小时~1.5小时太短， 如果可以请尽量照说明书的清洗容量 也就是120ml~200ml左右 当然偷懒方法就是找个两天花个时间，做完实验低极性比例跑一次，高极性比例跑一次 跑完确定都没东西全平，再用那个作依据来清洗， 清洗方式建议假设 水/甲醇 50/50>90/10>10/90(洗久一点) 接下来看你喜欢用哪个比例了，我会转成100%甲醇充满容积保存 会这样是因为，如果你是做天然物酸硷变化，那有时会有极少量到检测不出来的量 卡管柱，如果真的卡管柱时间和东西都很怪， 就乖乖用水/甲醇 50/50>90/10>10/90>你的移动相比例>测一针>平衡一晚 经验上就会好很多。 不过那个比例要自己试。 大概就这样~~~~~ 至於为啥会卡柱，我也不懂 囧 甚至到最後，因为我做的除了出来的一个未知物外有标准品，又用光谱侦测器 老师都叫我只要比对当次实验的滞留时间，其他的看光谱比对去判断就好....... --

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