作者awakening72 (无智亦无得)
看板Chemistry
标题[实验] 请教HPLC如何将peak拉开
时间Wed Aug 31 13:22:05 2016
小妹就读某国立大学
暑假在实验室学习HPLC
使用的column为C18 ，250mm x 4.6mm
梯度用全水下去跑
打样品出来如下图
http://i.imgur.com/vlegt1p.jpg
请问peak要怎麽拉开
因为三根peak几乎连在一起@@
小妹学疏短浅
感谢大家的帮忙^^
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1F：推 cuddi: 1. C18 column 不能用全水跑，会让 column 死掉.. 08/31 14:21
2F：→ cuddi: 2. peak 3分钟就跑出来，不确定你的流速，但大概是不滞留 08/31 14:23
流速是1ml/min ，column的体积为4ml(250mm X 4.6mm) 所以大概是4min後流出。
之前column充满全水後，以ACN上升梯度5%/min分离(流速1ml/min)，也是在4min前出来，所以就改跑一样流速的水...><
3F：推 cuddi: 可以换一根不同型态的 column 看看，如 normal phase 08/31 14:26
4F：推 blue010679: 全水要怎样拉梯度? 一定是非极性混水啊 08/31 14:27
5F：→ cuddi: 3. 如果为已知物，建议提供一下以给予建议 08/31 14:27
6F：→ cuddi: 4. 若为未知物，可以玩的空间还很大，目前提供的线索太少 08/31 14:28
7F：推 blue010679: C18 虽然有出aqua了但还是不建议全水 如果真的都全水 08/31 14:31
不好意思还是菜鸟>< 想请问一下C18不适合打全水的主要原因是什麽?
打完也会用ACN跑过清洗一段时间。一开始准备打前都是用全水跑到稳定再打，这样还是很伤column吗@@ 谢谢~
8F：→ blue010679: 跑了peak还这样的话要 要拉开只剩下流速放慢了 把流速 08/31 14:31
9F：→ blue010679: 减一半在跑一次 08/31 14:31
10F：→ blue010679: 空针的peak最好也给张图看一下你的系统体积RT是多少 08/31 14:32
11F：→ tony15899: 起码有4根peak 如果东西是已知物去查paper看方法 08/31 18:37
※ 编辑: awakening72 (140.130.176.192), 08/31/2016 19:41:57
12F：推 HPLC: 跑全水 C18会倒阿~~~~ 08/31 21:41
※ 编辑: awakening72 (140.130.176.192), 08/31/2016 21:41:26
13F：→ HPLC: 先看你的东西来自於哪里 大概里面是什麽 应该就很好判断了 08/31 21:45
14F：推 ruby40861: sample和column亲和力不够? 09/01 11:58
15F：→ ruby40861: 全部都水应该满伤C18 column吧 09/01 11:59
16F：推 cuddi: 水是高极性，C18是低极性，碰在一起就是GG惹~RIP 09/01 12:33
OMG@@
17F：推 blue010679: C18里面的填料是非极性的物质 结构问题 就跟蛋白质扔 09/01 13:22
18F：→ blue010679: 进醇里面一样 完全相反的液体会让结构瞬间变形 C18是 09/01 13:22
19F：→ blue010679: 非极性结构 纯水是高极性 瞬间变形多多少少会有一些无 09/01 13:22
20F：→ blue010679: 法恢复久了就gg了 09/01 13:22
21F：→ blue010679: 建议20%有机 把流速放慢 09/01 13:23
22F：→ blue010679: 洗管柱最好就是50%有机洗一次 20%有机洗一次80%以上有 09/01 13:27
23F：→ blue010679: 机再洗一次 第一次就用纯水还有个问题 通常C18分析的 09/01 13:27
24F：→ blue010679: 极性都不高最少比水低 纯水下去 很容易在里面结晶堵死 09/01 13:27
25F：→ blue010679: 或破坏填料结构 09/01 13:27
噢噢噢噢~~原来是这个原因，真的很严重啊!!! 太感谢了，不会再继续用全水跑C18 column啦QQ
※ 编辑: awakening72 (140.130.176.192), 09/01/2016 22:12:42
※ 编辑: awakening72 (140.130.176.192), 09/01/2016 22:14:50
26F：推 scy2468: 全水或是尽量不要100%去跑会死咖冷喔～还有千万不要逆洗 09/02 19:58
27F：→ scy2468: ，样品跑之前一定要确定没有杂质(或用小飞碟过滤，当然 09/02 19:58
28F：→ scy2468: 过滤可能会融出不必要的东西，这都是要做多次测试才知道 09/02 19:58
29F：→ scy2468: )。 09/02 19:58
30F：→ scy2468: 有问题可私讯 09/02 19:59
嗯嗯 好喔～会多注意一下的><
非常感谢啊啊啊！
31F：→ blue010679: 逆洗通常是你用到管柱老化要挂了 为了压榨最後剩余价 09/02 22:05
32F：→ blue010679: 值才会用逆洗 因为填充方向的问题 逆洗也会造成填料破 09/02 22:05
33F：→ blue010679: 坏 09/02 22:05
34F：推 ChesterYeah: 国立哪间阿？ 09/03 15:47
※ 编辑: awakening72 (114.39.122.165), 09/03/2016 20:46:21
35F：→ hadessage: 四分钟就出来 极性又用这麽大 流速改慢 再换个溶剂 09/04 16:13